Ac-Ds介導(dǎo)的大豆雜交群體的初步構(gòu)建及TAIL-PCR技術(shù)在大豆中的應(yīng)用研究.pdf

1、大豆是人類食用油和種子蛋白的主要來源之一，是重要的經(jīng)濟(jì)及糧食作物。近年來由于育種工作者的不斷努力，大豆育種已取得重大成就。但隨著人口數(shù)量的不斷增長(zhǎng)，提高大豆產(chǎn)量，改良大豆品質(zhì)仍是當(dāng)前的重要任務(wù)。通過分析和鑒定植物基因功能、發(fā)掘有益基因并用于育種，已成為發(fā)展趨勢(shì)，因此大豆功能基因組的研究迫在眉睫。研究基因最直接的方法之一是通過突變體來研究該基因的功能。大豆突變體庫(kù)的構(gòu)建可為分析大豆基因的功能提供理想的材料，大豆突變體的構(gòu)建還能獲得新性狀、

2、新類型，擴(kuò)大生物多樣性，為遺傳育種提供中間材料和新的種質(zhì)資源。 本研究試圖利用分子生物學(xué)手段，對(duì)本實(shí)驗(yàn)室前期轉(zhuǎn)化獲得的Ac和Ds可能純合系T<,4>代900余株進(jìn)行PCR檢測(cè)，進(jìn)一步確證純合系。在研究中發(fā)現(xiàn)了一個(gè)突變株系，并對(duì)它的品質(zhì)進(jìn)行了分析。系統(tǒng)的摸索了受體大豆品種吉林小粒一號(hào)對(duì)四種篩選劑的敏感性。探討了TAIL-PCR技術(shù)在大豆中的應(yīng)用可行性，并對(duì)其在大豆中的應(yīng)用條件進(jìn)行了優(yōu)化。為突變體的構(gòu)建、轉(zhuǎn)基因大豆后代篩選及運(yùn)用TA

3、IL-PCR技術(shù)克隆基因奠定了基礎(chǔ)。 具體研究結(jié)果如下： 1、系統(tǒng)摸索了受體大豆品種吉林小粒一號(hào)對(duì)四種篩選劑在種子萌發(fā)和三出復(fù)葉剛展開兩個(gè)階段對(duì)大豆的敏感性。結(jié)果表明：(1)在大豆萌發(fā)階段，卡那霉毒對(duì)大豆種子萌發(fā)沒有明顯的影響，卡那霉素不適合于在大豆萌發(fā)階段做大豆轉(zhuǎn)基因的篩選劑；潮霉素、綠貧隆和萘乙酰胺對(duì)大豆種子萌發(fā)的適宜臨界篩選濃度分別為11 mg/L、25p．p．m．和40 uM。(2)在大豆田間葉片涂抹大面積篩選階

4、段，卡那霉素、潮霉素和萘乙酰胺對(duì)大豆葉片涂抹的適宜篩選濃度分別為700mg/L、110 mg/L和600 uM，綠貧隆不適宜用作田間涂抹篩選。 2、對(duì)前期鑒定的Ac、Ds可能純合系T3代后代900多株進(jìn)行目的基因PCR檢測(cè)。初步確證得到Ac純合系1個(gè)，Ds純合系1個(gè)。 3、在轉(zhuǎn)基因后代Ac31-1 T<,3>代材料種植過程中，發(fā)現(xiàn)了大量的突變體，包括：種皮顏色發(fā)生變化38株，葉型發(fā)生變化11株，花色發(fā)生變化23株，開花期

5、成熟期變化64株，株高發(fā)生變化7株。 4、測(cè)定Ac31 T<,3>代73份突變?nèi)后w的蛋白質(zhì)及脂肪含量。突變?nèi)后w蛋白質(zhì)含量變化范圍為34.55-43.15％。油份含量變化范圍為15.99-19.97％。另外，把測(cè)定的70多份材料脂肪、蛋白質(zhì)含量的與未轉(zhuǎn)基因?qū)φ掌贩N進(jìn)行比較分析，結(jié)果顯示：其后代各株與對(duì)照均存在顯著性差異，即突變株系相對(duì)對(duì)照品種發(fā)生了突變。 5、構(gòu)建了大豆雜交群體。配雜交組合38對(duì)，收獲雜交種子120多個(gè)。