水楊酸誘導黃瓜幼苗抗冷性的基因表達.pdf

1、水楊酸(Salicylicacid，SA)是植物體內(nèi)的一種簡單的酚類物質(zhì)，作為內(nèi)源信號分子，在植物許多生理過程中起著非常重要的作用。SA能提高植物對生物脅迫和非生物脅迫的抗性，如微生物脅迫、溫度脅迫、滲透脅迫等。黃瓜（Cucumissativus）屬于葫蘆科甜瓜屬一年生草本植物，起源于亞熱帶，是典型的冷敏型植物。黃瓜所有組織以及果實都是對低溫敏感的，通常10～12℃即不能正常生長，低于5℃就會難以生存。通過對SA誘導的黃瓜冷脅迫相關(guān)基因

2、的分離及其性質(zhì)的研究，構(gòu)建抗冷性轉(zhuǎn)基因黃瓜品種，可解決園藝生產(chǎn)中黃瓜易受冷害的問題，同時可探討植物抗冷的機理和SA誘導植物抗逆性的分子機理。本實驗主要通過mRNA差異顯示技術(shù)和反向Northern雜交篩選SA誘導的黃瓜冷脅迫相關(guān)基因，并對這些基因的性質(zhì)進行初步探討和研究。
　　 以黃瓜幼苗為試驗材料，8±1℃冷脅迫下分別用SA(3mmol/L，pH6.0)溶液和蒸餾水噴施黃瓜（“新優(yōu)30”）幼苗，以處理后48h的葉片總RNA為模

3、板反轉(zhuǎn)錄cDNA，利用mRNA差異顯示技術(shù)和反向Northern雜交篩選冷脅迫下SA誘導的黃瓜幼苗cDNA，主要研究結(jié)果如下:
　　 1、mRNA差異顯示技術(shù)分離回收12個cDNA序列，經(jīng)反向Norhtern雜交驗證其中3個為SA顯著誘導但不是SA依賴表達的cDNA片段，分別命名為SICCL_1，SICCL_2和SICCL_3，Genbank登陸號分別為FG120885，F(xiàn)G120886和FG120887。cDNA片段連接到pG

4、M-T質(zhì)粒載體，轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α菌株，經(jīng)酶鑒定，測序。測序結(jié)果顯示:SICCL_1，SICCL_2和SICCL_3長度為178bp，201bp和241bp，約100～500bp。
　　 2、Blastn同源性檢索結(jié)果表明:SICCL_1與黃瓜花葉病毒(CucumberMosaicVirus，CMV)誘導的甜瓜葉片基因AM734282.2高度同源;SICCL_2與5個基因cDNA片段高度同源(EL890967.1，EH0507