肝復康膠囊對四氯化碳及氨基半乳糖所致肝損傷的實驗研究.pdf

1、本實驗的目的是探討肝復康膠囊對四氯化碳及氨基半乳糖所致肝損傷的保護作用，以及對急性肝損傷可能的保護機制。 研究方法： 1.肝復康膠囊對CCl4所致肝損傷的實驗研究。取昆明種小鼠60只，雌雄各半，體重18～22g，采用隨機抽樣的方法，分成六組，每組10只，即空白對照組(A組)，肝損傷模型組(B組)，陽性對照藥聯(lián)苯雙酯組(C組)，肝復康膠囊三個劑量組：小劑量組(D組)，中劑量組(E組)，大劑量組(F組)。以上各組均灌胃給藥，

2、A，B組：給以生理鹽水，C組：聯(lián)苯雙酯200mg/kg.d，D組：肝復康0.9g/kg.d，E組：肝復康1.8g/kg.d，F(xiàn)組：肝復康3.6g/kg.d，一天一次，連續(xù)7天，于末次給藥后1小時，除空白對照組外，其余各組均腹腔注射0.1％四氯化碳(CCl4)10ml/kg，空白對照組腹腔注射等量豆油。24小時后測定各項指標，測定各項指標前自由飲水，禁食12小時。①摘取眼球取血，賴氏法測定丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)和天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(A

3、ST)。②每只小鼠取肝左葉部位大致相同的一小塊肝組織約0.5cm3，固定于Bone氏液中，制成石蠟切片，HE染色，作病理切片檢查。病理評估方法：(一)正常肝細胞。(+)肝細胞變性呈點狀壞死。(++)肝細胞變性呈灶性壞死，或病變的肝細胞小于肝小葉的1/3。(+++)肝小葉1/3～2/3肝細胞壞死。(++++)肝小葉超過2/3的肝細胞壞死。③取肝右葉組織塊，于冰冷的PBS液沖洗后稱重，4℃下用勻漿器研磨成10％組織勻漿，于4000r/min

4、離心10min，取上清液，檢測超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)水平。所有結(jié)果均采用Excel軟件提供的兩組間t檢驗和方差分析方法，對數(shù)據(jù)進行處理，等級資料用秩和檢驗。 2.肝復康膠囊對D-GalN所致肝損傷的實驗研究。取昆明種小鼠60只，雌雄各半，體重18～22g，采用隨機抽樣的方法，分成六組，每組10只，即空白對照組(A組)，肝損傷模型組(B組)，陽性對照藥聯(lián)苯雙酯組(C組)，肝復

5、康膠囊三個劑量組：小劑量組(D組)，中劑量組(E組)，大劑量組(F組)。以上各組均灌胃給藥，A，B組：給以生理鹽水，C組：聯(lián)苯雙酯200mg/kg.d，D組：肝復康0.9g/kg.d，E組：肝復康1.8g/kg.d，F(xiàn)組：肝復康3.6g/kg.d一天一次，連續(xù)7天，于末次給藥后1小時，除空白對照組外，其余各組均給予10％D-氨基半乳糖(生理鹽水配制)，按照800mg/kg腹腔注射，空白對照組腹腔注射等量生理鹽水，24小時后測定各項指標，

6、測定各項指標前禁食12小時，自由飲水。①摘取眼球取血，賴氏法測定丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)。②每只小鼠取肝左葉部位大致相同的一小塊肝組織約0.5cm3，固定于Bone氏液中，制成石蠟切片，HE染色，作病理切片檢查。病理評估方法：(一)正常肝細胞。(+)肝細胞變性呈點狀壞死。(++)肝細胞變性呈灶性壞死，或病變的肝細胞小于肝小葉的1/3。(+++)肝小葉1/3～2/3肝細胞壞死。(++++)肝小葉超過2/3的肝細胞壞

7、死。采用Excel軟件提供的兩組間t檢驗和方差分析方法，對數(shù)據(jù)進行處理。 研究結(jié)果： 1.肝復康膠囊對CCl4所致肝損傷小鼠肝功能的影響。 1.1.對ALT活性的影響：模型組小鼠ALT含量(250.6±29.9U)顯著高于正常空白組(39.2±8.26U)(P＜0.01)，提示肝損傷模型復制成功。肝復康膠囊0.9g/kg、1.8g/kg和3.6g/kg能明顯降低CCl4損傷小鼠血清ALT活性，分別為：142±12

8、.7U、121.4±13U和105.5±11U，顯著低于模型對照組(P＜0.01)。表明肝復康膠囊小、中、大劑量均能降低CCl4肝損傷小鼠血清ALT的作用。 1.2.對AST活性的影響：與空白對照組AST活性(397.4±23.5U)比較，模型組(488.2±19.5U)明顯升高(P＜0.01)，與模型組比較，肝復康組的AST活性顯著降低，分別為436±27.8U、426.9±15.1U和454.1±24.2U(P＜0.01)。

9、 2.肝復康膠囊對CCl4所致肝損傷小鼠肝臟病理形態(tài)學的影響。光鏡下：正常對照組可見肝小葉結(jié)構(gòu)清晰，肝細胞結(jié)構(gòu)正常，未見纖維化及肝細胞壞死，肝細胞索結(jié)構(gòu)清晰，圍繞中央靜脈呈放射狀排列；CCl4損傷組可見肝臟正常結(jié)構(gòu)被破壞，肝小葉排列紊亂，肝細胞邊界不清楚，胞漿疏松，肝竇受壓變窄，肝細胞大量變性壞死，有氣球樣變或嗜酸性變，匯管區(qū)大量淋巴細胞浸潤且有大量的膠原纖維增生。經(jīng)秩和檢驗，模型組肝損傷程度較正常對照組，顯著為重(P＜0.05

10、)。肝復康各劑量組可見肝小葉結(jié)構(gòu)大致正常，肝細胞變性壞死情況較輕，與模型組比較肝臟病理改變有顯著改善(P＜0.05)。 3.肝復康膠囊對CCl4所致肝損傷小鼠肝組織勻漿MDA(丙二醛)、SOD(超氧化物歧化酶)和GSH-Px(谷胱甘肽過氧化物酶)的影響。 3.1.對MDA含量(nmol/mgprot)的影響：與空白對照組(5.86±0.95)比較，肝損傷組的MDA含量(14.63±2.67)顯著升高(P＜0.01)；而肝

11、復康各劑量(9.35±1.76；6.92±1.63；9.56±1.83)均能有效改善CCl4所致的MDA含量升高(P＜0.01)。 3.2.對SOD活性(U/mgprot)的影響：與空白對照(3.62±0.36)比較，肝損傷組的SOD活性(2.03±0.40)顯著降低(P＜0.01)；而肝復康各劑量(2.66±0.08、3.23±0.49、3.10±0.23)均能改善CCl4所致的SOD活性降低(P＜0.05，P＜0.01，P＜

12、0.01)。 3.3.對GSH-Px活性的影響：與空白對照(29.66±0.68U)比較，肝損傷組的GSH-Px活性(16.51±0.54U)顯著降低(P＜0.01)；而肝復康各劑量(19.47±0.15U、29.92±0.21U、28.46±0.63U)均能有效改善CCl4所致的GSH-Px活性降低(P＜0.05，P＜0.01，P＜0.01)。 4.肝復康膠囊對D-GalN所致肝損傷小鼠肝功能的影響。 4.1.

13、對ALT活性的影響：模型組小鼠ALT活性(195±13.1U)顯著高于正?？瞻捉M(32.1±4.6U)(P＜0.01)，說明D-GalN肝損傷模型復制成功。肝復康膠囊0.9g/kg、1.8g/kg和3.6g/kg均能明顯降低D-GalN損傷小鼠血清ALT活性，分別為：154.8±12.9U、140.8±24.1U和180.3±15.1U，顯著低于模型組(P＜0.01)。表明肝復康膠囊、中、大劑量均能顯著改善D-GalN所致小鼠肝損傷。

14、 4.2.對AST活性的影響：與空白對照組AST活性(296.4±15.2U)比較，模型組的AST活性(367±18.2U)明顯升高(P＜0.01)，肝復康組的AST活性分別為323.2±31.1U、320.5±18.4U和323.6±16.9U，顯著低于模型組(P＜0.01)。進一步表明本膠囊可有效改善D-GalN所致小鼠肝損傷。 5.肝復康膠囊對D-GalN所致肝損傷小鼠肝臟病理形態(tài)學觀察。光鏡下：正常對照組可見肝細胞

15、圍繞中央靜脈呈放射狀排列，肝細胞大小正常，肝細胞索結(jié)構(gòu)清晰，肝小葉結(jié)構(gòu)完整；D-GalN損傷組：全組動物均顯示中毒性肝損傷病理改變，肝細胞發(fā)生廣泛的水樣，胞漿疏松及混濁腫脹，肝細胞可見點狀和灶性壞死，可見核分裂，嗜酸性小體及脂肪變，匯管區(qū)炎性細胞浸潤。模型組肝損傷較正常對照為重(P＜0.05)。肝復康各組及聯(lián)苯雙脂組僅個別肝細胞出現(xiàn)混濁腫脹，與模型組比較，肝臟病理有明顯改善。 研究結(jié)論：本實驗研究結(jié)果表明：肝復康膠囊能明顯的降低