常壓離子源在藥物-血漿蛋白親和力考察和游離血藥濃度檢測中的應(yīng)用.pdf

1、近年來,隨著藥物-血漿蛋白親和力以及游離血藥濃度的研究領(lǐng)域的發(fā)展,研究者對(duì)其檢測手段不斷提出更高的要求,發(fā)展新的高通量、便捷的檢測方法意義重大。常壓質(zhì)譜技術(shù)能直接、實(shí)時(shí)、快速、原位的提供分子的結(jié)構(gòu)信息,將它應(yīng)用于藥物-血漿蛋白親和力以及游離血藥濃度的檢測中,能為其研究提供一條新的途徑。本論文著重研究了基于解吸附電噴霧離子源和文丘里簡易常壓超聲噴霧離子源檢測藥物-血漿蛋白親和力以及游離血藥濃度的新方法。主要包括以下工作:
　　一、利

2、用解吸附電噴霧質(zhì)譜(Desorption Electrospray IonizationMass Spectrometry, DESI-MS)解決了目前藥物-血漿蛋白研究存在的三方面的問題。第一,在負(fù)電區(qū)域抑制解離機(jī)理的基礎(chǔ)上,有負(fù)電位點(diǎn)的蛋白不會(huì)釋放特異性結(jié)合的配體,本身可以作為參比蛋白,省去了為每一種藥物尋找參比蛋白的過程。第二,提取離子流圖檢測的是藥物分子的準(zhǔn)分子離子峰,而不是藥物-蛋白復(fù)合物,這樣,氣相庫倫爆炸誘導(dǎo)解離可以起到一

3、個(gè)積極的作用,而不是影響檢測的作用。第三,我們自行搭建的全自動(dòng)移動(dòng)平臺(tái)可以解決分析速度慢的問題。我們選擇僅有一個(gè)特異性結(jié)合位點(diǎn)的α1-酸性糖蛋白作為模式蛋白,先前文獻(xiàn)已經(jīng)報(bào)導(dǎo)了DMOA可以作為α1-酸性糖蛋白的置換劑。我們的工作分為三部分,第一,用(R)、(S)型氨氯地平作為模式配體,證明了負(fù)電區(qū)域抑制解離機(jī)理,它們與α1-酸性糖蛋白的立體選擇性特異性結(jié)合已經(jīng)被報(bào)導(dǎo)。第二,我們用5種α-腎上腺素受體阻滯劑和10種β-腎上腺素受體阻滯劑證

4、明了我們方法的高通量屬性。我們?cè)?.3分鐘內(nèi)獲得了15*3個(gè)樣本點(diǎn)的全部數(shù)據(jù)信息。第三,幾乎不與α1-酸性糖蛋白發(fā)生作用的阿替洛爾和莫索尼定被選為內(nèi)標(biāo)物,以校正噴入離子傳輸管體積的差別,與先前的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相一致,證明我們的方法至少是半定量的方法。
　　二、利用文丘里-簡易常壓超聲噴霧質(zhì)譜(Venturi Easy Ambient Sonic-Spray Ionization Mass Spectrometry, V-EASI-MS)

5、建立了一種實(shí)時(shí)在線監(jiān)測藥物-負(fù)電位點(diǎn)蛋白結(jié)合的方法,體系由兩部分組成:商業(yè)化的線性離子阱(LTQ)質(zhì)量分析器和自行搭建的文丘里-簡易常壓超聲噴霧離子源。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步證明了我們首先提出并驗(yàn)證的負(fù)電區(qū)域抑制解離機(jī)理(Anionic region inhibited dissociation mechanism)。機(jī)理描述了負(fù)電區(qū)域在特異性結(jié)合配體解離中的作用。為了區(qū)分特異性以及非特異性的相互作用,我們首先在沒有特異性結(jié)合藥物解離的條