海馬神經(jīng)細胞胞內(nèi)鈣離子濃度的檢測及其在藥物評價中的應(yīng)用.pdf

1、該文研究了不同鈣離子通道即NMDA受體通道和L型離子通道對鈣離子內(nèi)流的影響;通過研究藥物對NMDA受體通道和L型鈣離子通道的阻斷作用對藥物的神經(jīng)保護作用進行評價;同時還開發(fā)了基于數(shù)字圖像處理的神經(jīng)細胞內(nèi)鈣離子濃度變化的分析軟件.在該研究的第一部分,我們分別對NMDA和甘氨酸刺激下神經(jīng)細胞NMDA受體通道開放導(dǎo)致的鈣離子內(nèi)流,以及高濃度的KCl(150mM)刺激下神經(jīng)細胞L型電壓依賴型(VGCC)通道開放導(dǎo)致的細胞鈣離子內(nèi)流進行了檢測.結(jié)

2、果表明,在NMDA刺激下,神經(jīng)細胞內(nèi)鈣離子有一緩慢的上升過程,而在高濃度KCl刺激下,神經(jīng)細胞內(nèi)鈣離子快速增加.這提示,不同鈣離子通道的響應(yīng)模型存在明顯的差異.在該研究的第二部分,我們用離體細胞模型來評價MK-801和尼莫地平對神經(jīng)細胞的保護作用.當(dāng)加入非競爭性的NMDA受體阻斷劑MK-801后,神經(jīng)細胞內(nèi)鈣離子水平顯著降低,表明在甘氨酸協(xié)同的NMDA刺激中,NMDA受體通道是鈣離子進入神經(jīng)細胞的主要通道.在高濃度的KCl刺激前先加入尼

3、莫地平(0.5 μg/m1),我們發(fā)現(xiàn)鈣離子熒光強度呈下降趨勢.這表明尼莫地平阻斷了L型電壓依賴型鈣離子通道,鈣離子濃度水平?jīng)]有升高.因而MK-80l和尼莫地平可能具有神經(jīng)保護功能.作為該研究的第三部分,我們自行開發(fā)了通過分析共聚焦顯微鏡圖像的熒光強度來檢測神經(jīng)細胞內(nèi)鈣離子濃度變化的計算機軟件.通過此軟件研究了體外培養(yǎng)的海馬神經(jīng)細胞在缺氧缺糖(OGD)狀態(tài)下細胞內(nèi)鈣離子濃度變化,取得了滿意的結(jié)果.我們的研究表明,不同的刺激可以激活不同的