擴(kuò)張應(yīng)力作用下皮膚組織學(xué)變化規(guī)律的研究.pdf

1、皮膚軟組織擴(kuò)張術(shù)因其在組織修復(fù)與重建方面的臨床應(yīng)用范圍廣,早已成為整形外科最為常用的治療手段之一,但也存在治療周期較長、擴(kuò)張后的皮膚質(zhì)地改變、回縮率高等缺點。如何在較短的治療周期內(nèi)擴(kuò)張獲得面積大并且質(zhì)地好的皮膚就成了基礎(chǔ)研究努力的方向。本論文的第一部分介紹應(yīng)用自行改良設(shè)計擴(kuò)張器構(gòu)建大鼠皮膚軟組織擴(kuò)張模型的實驗方法,并結(jié)合HE染色和PCNA免疫組織化學(xué)染色結(jié)果證明其擴(kuò)張效果。希望能為研究擴(kuò)張皮膚的新生機(jī)制提供一個良好、成熟、穩(wěn)定的皮膚軟組

2、織擴(kuò)張動物模型。本論文的第二部分介紹不同擴(kuò)張時期皮膚膠原纖維變化的規(guī)律,通過Masson染色和天狼星紅染色,觀察皮膚中的膠原纖維在不同擴(kuò)張階段的變化趨勢和規(guī)律,探索擴(kuò)張后皮膚回縮率高及部分患者擴(kuò)張后皮膚有類似“妊娠紋”樣外觀的原因所在;為后續(xù)研究如何通過改變擴(kuò)張方式或添加人工干預(yù)因素調(diào)控膠原類型變化、降低擴(kuò)張后皮膚的回縮率提供一個研究基礎(chǔ)。本論文的第三部分介紹真皮干細(xì)胞在擴(kuò)張皮膚新生中作用的實驗假設(shè)與初步探索,探索擴(kuò)張皮膚組織中真皮部分

3、的新生機(jī)制,為研究如何促進(jìn)擴(kuò)張皮膚新生奠定一定的實驗基礎(chǔ)。
　　第一部分應(yīng)用自行改良設(shè)計擴(kuò)張器構(gòu)建大鼠皮膚軟組織擴(kuò)張模型
　　目的:采用自行改良設(shè)計的短注射導(dǎo)管枕形擴(kuò)張器構(gòu)建大鼠皮膚軟組織擴(kuò)張模型,并探討擴(kuò)張模型產(chǎn)生的擴(kuò)張應(yīng)力對皮膚細(xì)胞增殖的影響,證明其擴(kuò)張效果,為皮膚軟組織擴(kuò)張的基礎(chǔ)研究提供一個良好、穩(wěn)定的動物模型。
　　方法:將SD大鼠按每組30只,隨機(jī)分為A、B兩組;A組應(yīng)用自行改良設(shè)計的枕形擴(kuò)張器,B組應(yīng)用威寧

4、公司生產(chǎn)的常規(guī)擴(kuò)張器,在大鼠頸部做切口、埋置擴(kuò)張器,注射壺外置,構(gòu)建皮膚擴(kuò)張模型。分別在擴(kuò)張后第1、2、3、4、5周采集A組大鼠擴(kuò)張中心部位的皮膚和正常未擴(kuò)張的皮膚作為組織標(biāo)本。HE染色、鏡下觀察不同擴(kuò)張時期皮膚組織結(jié)構(gòu)在擴(kuò)張應(yīng)力刺激下發(fā)生了哪些改變;依據(jù)增殖細(xì)胞為 PCNA+細(xì)胞,進(jìn)行免疫組化染色觀察擴(kuò)張應(yīng)力刺激對皮膚細(xì)胞增殖產(chǎn)生的影響。
　　結(jié)果: A組應(yīng)用改良擴(kuò)張器構(gòu)建的擴(kuò)張模型中,外置的注射壺術(shù)后不易被鼠咬掉,且擴(kuò)張囊注水

5、及術(shù)后護(hù)理更為簡便,模型構(gòu)建的穩(wěn)定性明顯高于B組。HE染色觀察:擴(kuò)張應(yīng)力作用下,皮膚表皮層變厚、真皮層變薄;PCNA免疫組化染色結(jié)果發(fā)現(xiàn):增殖細(xì)胞(PCNA+細(xì)胞)呈點狀散在分布于表皮的基底層及毛囊鞘周圍,PCNA+細(xì)胞數(shù)目在擴(kuò)張后的第3周達(dá)到最高峰。
　　結(jié)論:自行改良設(shè)計的擴(kuò)張器,是一種更適用于構(gòu)建大鼠擴(kuò)張動物模型的實驗材料;其產(chǎn)生了有效的擴(kuò)張應(yīng)力刺激,對大鼠的皮膚組織結(jié)構(gòu)及皮膚細(xì)胞的增殖產(chǎn)生了影響。
　　第二部分不同擴(kuò)

6、張時期皮膚膠原纖維變化規(guī)律的研究
　　目的:通過實驗分析不同擴(kuò)張時期皮膚中,單位面積內(nèi)膠原纖維含量的變化,以及I型和III型膠原纖維所占比例發(fā)生了怎樣的變化,并與正常未擴(kuò)張皮膚中的膠原纖維特征進(jìn)行比較,總結(jié)擴(kuò)張過程中皮膚膠原纖維的變化規(guī)律。
　　方法:選擇動物實驗中不同擴(kuò)張時期(擴(kuò)張后第1到5周)的皮膚組織和正常未擴(kuò)張的皮膚組織作為標(biāo)本,進(jìn)行Masson染色和天狼星紅染色,分別在光學(xué)顯微鏡和偏振光顯微鏡下觀察并拍照,用Ima

7、ge-Pro Plus6.0圖像分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。
　　結(jié)果:與正常未擴(kuò)張的皮膚組織進(jìn)行比較,擴(kuò)張后的皮膚組織中單位面積內(nèi)膠原纖維的含量降低,排列疏松;I型膠原纖維所占比例下降,III型膠原纖維所占比例升高。
　　結(jié)論:單位面積內(nèi)膠原纖維含量的降低及I型和III型膠原纖維所占比例的變化可能是擴(kuò)張后皮膚質(zhì)地發(fā)生變化、回縮率高的主要原因。
　　第三部分真皮干細(xì)胞在擴(kuò)張皮膚新生中作用的實驗假設(shè)與初步探索
　　目的:

8、通過本部分的實驗假設(shè)和初步探索,探究真皮干細(xì)胞在擴(kuò)張應(yīng)力作用下發(fā)生增殖分化的方向,希望能夠了解擴(kuò)張皮膚組織中真皮部分的新生機(jī)制,為研究如何促進(jìn)擴(kuò)張皮膚新生奠定實驗基礎(chǔ)。
　　方法: Brdu活體標(biāo)記新生SD鼠皮膚中的成體干細(xì)胞,在5周齡時構(gòu)建皮膚軟組織擴(kuò)張模型,取正常未擴(kuò)張和擴(kuò)張后第1-5周的皮膚組織作為標(biāo)本,擬進(jìn)行PCNA免疫熒光染色、Brdu免疫熒光染色和兩者的雙標(biāo)共定位免疫熒光染色。并通過Brdu標(biāo)記體外培養(yǎng)的293T細(xì)胞進(jìn)

9、行免疫熒光染色,檢驗我們購買的抗體和染色技術(shù)。
　　結(jié)果:在擴(kuò)張后的皮膚組織中能夠明顯觀察到綠色熒光的PCNA+細(xì)胞,PCNA+細(xì)胞的數(shù)目明顯比未擴(kuò)張的皮膚組織中數(shù)量增多。在正常未擴(kuò)張的皮膚組織中能夠觀察到少量呈綠色熒光的Brdu+細(xì)胞,但在擴(kuò)張后的皮膚組織中尚未發(fā)現(xiàn)Brdu+細(xì)胞。Brdu標(biāo)記293T細(xì)胞進(jìn)行免疫熒光染色,Brdu+細(xì)胞占細(xì)胞總量的85％左右(表明購買的抗體、試劑具有較高的特異性,不會影響活體標(biāo)記和組織學(xué)的染色;