黃芩苷對NMDA受體介導(dǎo)的兔缺血性脊髓損傷的神經(jīng)保護作用的研究.pdf

1、目的：1、探討通過選擇性結(jié)扎左腎動脈以下5根腰動脈來建立兔缺血性脊髓損傷模型的重復(fù)性及穩(wěn)定性。
　　2、探討黃芩苷對NMDA受體介導(dǎo)的兔缺血性脊髓損傷的神經(jīng)保護作用。
　　方法：1、新西蘭大白兔16只，取8只通過選擇性結(jié)扎左腎動脈以下5根腰動脈的方法建立缺血性脊髓損傷模型，設(shè)為模型組。另外8只解剖出腰動脈但不結(jié)扎，設(shè)為假手術(shù)組。相同條件下飼養(yǎng)72h，利用改良的Tarlov法評分標準對兩組動物后肢進行神經(jīng)運動功能評分、采用核磁

2、共振成像技術(shù)(MRI)觀察兩組脊髓缺血變化、利用2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色(TTC staining)觀察脊髓缺血性損傷、運用蘇木素-伊紅(HE staining)染色方法觀察兩組動物脊髓前角的形態(tài)學(xué)改變。
　　2、取32只新西蘭大白兔，24只結(jié)扎其腰動脈，建立缺血性脊髓損傷模型。隨機分為模型組、低劑量組、高劑量組，分別腹腔注射等量生理鹽水、100mg.kg-1.d-1黃芩苷和200mg.kg-1.d-1黃芩苷，另取8只設(shè)立

3、假手術(shù)組，只分離腰動脈但不結(jié)扎，腹腔注射等量生理鹽水，24h及48 h再按上述劑量各注射一次,72 h后過度麻醉取L3－L5段脊髓，進行HE染色觀察脊髓前角形態(tài)學(xué)改變。原位末端轉(zhuǎn)移酶標記技術(shù)(TUNEL)檢測脊髓細胞凋亡情況，免疫組化檢測N－甲基－D－天門冬氨酸受體(NMDAR)、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)表達細胞百分比。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)系統(tǒng)(RT-PCR)測定NMDAR,iNOS,Casp

4、ase-3 mRNA的表達水平，觀察不同劑量黃芩苷對脊髓缺血的神經(jīng)保護作用。
　　結(jié)果：1、模型組后肢無運動，不能負重，評分為0分，假手術(shù)組則后肢運動自如，未見明顯功能障礙，評分為5分,差別具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。MRI結(jié)果提示模型組脊髓有明顯缺血軟化灶，連續(xù)性中斷，缺血灶呈高信號，而假手術(shù)組脊髓則結(jié)構(gòu)完整，呈連續(xù)均勻的低信號。TTC及HE染色結(jié)果顯示模型組脊髓缺血性損傷明顯，假手術(shù)組無明顯損傷。
　　2、HE染色結(jié)

5、果顯示模型組脊髓正常結(jié)構(gòu)完全消失，低劑量組結(jié)構(gòu)較完整，假手術(shù)組呈正常脊髓結(jié)構(gòu)。高劑量組缺血損害情況介于低劑量組于假手術(shù)組之間。凋亡指數(shù)、表達NMDAR,iNOS,Caspase-3的陽性細胞百分比及相應(yīng)mRNA表達水平，模型組最高，低劑量組、高劑量組，假手術(shù)組則依次降低,差別具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論：1、采用選擇性結(jié)扎左腎動脈以下5根腰動脈的方法可以建立重復(fù)強、成功率高、存活時間長、并發(fā)癥少且滿足本實驗要求的穩(wěn)定