AMPA受體拮抗劑對新生鼠缺氧缺血性腦損傷的保護作用.pdf

1、目的:新生兒缺氧缺血性腦損傷(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)是造成新生兒死亡和兒童永久性神經(jīng)功能障礙的常見原因.其發(fā)病機制尚不完全清楚,因此缺乏有效的防治手段.近年研究表明AMPA谷氨酸受體在HIBD發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用.該實驗采用新生鼠HIBD模型,應(yīng)用選擇性非競爭性AMPA受體拮抗劑GYKI52466進行干預(yù),觀察海馬CA1區(qū)神經(jīng)元數(shù)、腦白質(zhì)髓鞘堿性蛋白(myelin basic prot

2、ein,MBP)、神經(jīng)絲(neurofilament,NF)蛋白表達變化,了解治療對腦中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、還原型谷光甘肽(reduced glutathione,GSH)及細胞凋亡的影響,通過測試實驗動物學(xué)習(xí)記憶功能認(rèn)識治療的遠期效果,初步探討GYKI-52466在新生鼠HIBD中的保護作用及機制,為臨床防治新生兒缺氧缺血性腦病(hypo

3、xic-ischemic encephalopathy HIE)尋求新的途徑.方法:7日齡(postnatal day 7,P7)Wistar大鼠,采用Rice法建立新生鼠HIBD模型,隨機分成正常對照組、假手術(shù)組、缺氧缺血組及 GYKI-52466干預(yù)組.正常對照組用于觀察MBP、NF在正常新生鼠的表達情況,其余三組于缺氧缺血(hypoxia-ischemia,HI)后24小時(24h)、1周(1w)取腦,HE染色觀察組織病理改變,計

4、數(shù)海馬CA1區(qū)神經(jīng)元數(shù);免疫組化、圖像分析法測雙側(cè)腦半球橫截面積之比,檢測腦組織MBP、NF表達及積分光密度值;生化法檢測各組大鼠腦組織MDA、SOD、GSH水平;TUNEL法檢測腦組織細胞凋亡;于P30用 Morris水迷宮測試大鼠學(xué)習(xí)記憶功能.結(jié)果:(1) HI后患側(cè)腦組織橫截面積下降.HI后1w,缺氧缺血組患側(cè)與對側(cè)腦半球橫截面積之比(L:RAREA)較假手術(shù)組明顯降低(p<0.001);GYKI-52466干預(yù)組L:R AREA

5、值明顯高于缺氧缺血組(p<0.001).(2) MBP在P8無顯著表達.P11嗅束、紋狀體、胼胝體、內(nèi)囊、外囊染色陽性,可見少許突起延伸至皮層.P14上訴部位表達更加豐富,前聯(lián)合出現(xiàn)染色陽性.NF-H表達部位與MBP相似,但表達量較少.HI后1w,缺氧缺血組患側(cè)與對側(cè)腦組織MBP積分光密度之比(左側(cè):右側(cè),L:RMBP)明顯低于假手術(shù)組(p<0.02),干預(yù)組L:RMBP高于缺氧缺血組(p<0.05).HI后及治療后NF-H表達變化趨勢

6、與MBP相似.(3) HI后1w,缺氧缺血組CA1區(qū)神經(jīng)元數(shù)顯著降低(p<0.001),干預(yù)組CA1區(qū)神經(jīng)元數(shù)較缺氧缺血組明顯增多(p<0.001).(4) 假手術(shù)組新生鼠腦中偶見TUNEL陽性細胞,缺氧缺血組TUNEL陽性細胞數(shù)顯著增多,GYKI-52466干預(yù)使得TUNEL陽性細胞數(shù)明顯減少(p<0.01);(5) HI后24h檢測,缺氧缺血組SOD活力、GSH含量明顯低于假手術(shù)組(p<0.001,p<0.001),MDA含量明顯高

7、于假手術(shù)組(p<0.001).GYKI-52466干預(yù)組腦組織SOD活力、GSH含量明顯高于缺氧缺血組(p<0.001,p<0.005),MDA含量明顯低于缺氧缺血組(p<0.001).(6) 生后30天,缺氧缺血組大鼠的學(xué)習(xí)、記憶功能嚴(yán)重受損,Morris水迷宮實驗逃避潛伏期(EL)較假手術(shù)組延長,撤除平臺后90秒內(nèi)跨越平臺次數(shù)減少(p<0.001);而與缺氧缺血組相比GYKI-52466干預(yù)組大鼠的學(xué)習(xí)、記憶功能障礙明顯減輕,逃避潛

8、伏期縮短,跨越平臺次數(shù)增加(p<0.01).結(jié)論: 1. 7日齡Wistar大鼠,結(jié)扎一側(cè)頸總動脈后予低氧(8﹪O<,2>)2.5小時,制成HIBD模型,患側(cè)腦組織可見梗死灶及萎縮現(xiàn)象,神經(jīng)細胞壞死、凋亡,模型成功可行.2. HIBD新生鼠患側(cè)腦組織MBP、NF-H表達下降,CA1區(qū)神經(jīng)元數(shù)減少,反映不僅新生鼠腦灰質(zhì)對缺氧缺血敏感,腦白質(zhì)同樣對缺氧缺血損害存在敏感性.3. GYKI-52466能減少神經(jīng)元損傷,減輕HIBD大鼠患側(cè)腦組織

9、MBP、NF-H表達下降程度,說明腹腔注射GYKI-52466不僅對HIBD的神經(jīng)元損害具有保護作用,也能保護少突膠質(zhì)細胞和軸突.4. GYKI-52466治療提高患側(cè)腦組織SOD、GSH水平,降低MDA水平,減少細胞凋亡,提示GYKI-52466可能通過減輕氧化應(yīng)激、抗凋亡機制發(fā)揮腦保護作用.5. 新生鼠HIBD后出現(xiàn)遠期學(xué)習(xí)記憶功能障礙,GYKI-52466治療能顯著改善HIBD新生鼠的學(xué)習(xí)記憶功能,提示早期干預(yù)對保護遠期學(xué)習(xí)記憶功