柔嫩艾美耳球蟲(chóng)雜交F2株致弱方法及免疫原性的研究.pdf

1、雞球蟲(chóng)病(Coccidiosis)是一種分布廣、危害性大的腸道寄生原蟲(chóng)病，它主要侵害雞的腸上皮細(xì)胞。該病以出血性腸炎、血痢、雛雞高發(fā)病率和死亡率為特征，成為危害養(yǎng)雞業(yè)的重要疾病之一。目前，控制球蟲(chóng)病仍以藥物防治為主，但由于耐藥蟲(chóng)株的普遍產(chǎn)生以及化學(xué)藥物的殘留等問(wèn)題使得抗球蟲(chóng)藥物的研制開(kāi)發(fā)受到極大的限制。免疫預(yù)防是控制球蟲(chóng)病的理想方法，利用雞弱毒球蟲(chóng)疫苗防治雞球蟲(chóng)病不僅能徹底解決雞球蟲(chóng)的耐藥性問(wèn)題，而且能夠生產(chǎn)出綠色食品，保證肉、蛋質(zhì)量。

2、本研究探索致弱柔嫩艾美耳球蟲(chóng)雜交株卵囊的物理和化學(xué)方法，并對(duì)致弱卵囊免疫保護(hù)性和抗體消長(zhǎng)規(guī)律進(jìn)行研究。 采用常規(guī)法擴(kuò)增雜交株卵囊，并用物理方法和化學(xué)方法將其致弱。首先，將孢子化卵囊，在一定功率、不同超聲時(shí)間的超聲波作用下致弱，置于4℃冰箱備用。然后，配制化學(xué)致弱劑，將孢子化卵囊和化學(xué)致弱劑攪拌混合均勻，置于4℃冰箱致弱40d。將致弱卵囊口服接種肉雞，進(jìn)行肉雞免疫性能試驗(yàn)。用卵囊計(jì)數(shù)、糞便記分、平均增重和免疫存活率等指標(biāo)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分

3、析。建立檢測(cè)雞血清抗體OD值的間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)，按照間接ELISA實(shí)驗(yàn)方法的程序確定抗原最佳包被濃度、酶結(jié)合物工作濃度、被檢血清最佳稀釋度。采用上述條件探討物理和化學(xué)方法致弱雜交卵囊免疫雞后血清抗體OD值的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律。 實(shí)驗(yàn)表明，超聲波致弱柔嫩艾美耳球蟲(chóng)雜交F2株卵囊10min可有效地使球蟲(chóng)卵囊的毒力減弱，免疫劑量為每只雞4×10<'3>個(gè)卵囊，分別于7日齡和14日齡口服接種致弱雜交球蟲(chóng)卵囊疫苗免疫，攻蟲(chóng)后7

4、d肉雞平均增重達(dá)155g，與對(duì)照組每只雞平均增重25g相比差異極顯著(p<0.01)，攻蟲(chóng)存活率達(dá)100％。使用廉價(jià)、易得的化學(xué)試劑制備化學(xué)致弱劑，確定免疫劑量為每只雞8×10<'3>個(gè)感染性卵囊，分別于7日齡和14日齡口服致弱球蟲(chóng)卵囊疫苗免疫，攻蟲(chóng)后7d肉雞平均增重達(dá)165g，與對(duì)照組每只雞平均增重25g相比差異極顯著(p<0.01)，攻蟲(chóng)存活率也達(dá)100％。選用的化學(xué)致弱劑致弱F2株卵囊及在一定功率下超聲處理雜交F2株卵囊10min