核轉(zhuǎn)錄因子SATB1表達與腎細胞癌生物學行為的關系及其臨床意義.pdf

1、本文分兩個部分進行探討：
　　第一部分：SATB1表達影響RCC細胞生物學行為的實驗研究
　　目的：探討核轉(zhuǎn)錄因子SATB1在不同腎癌細胞系中的表達情況，以及SATB1基因表達對腎癌細胞增殖、侵襲能力的影響。
　　方法：分別應用實時定量PCR、Western blotting與免疫熒光染色法檢測不同腎癌細胞系中SATB1的表達情況。在構建靶向沉默SATB1的pGenesil2-SATB1-shRNA和SATB1過表達真

2、核表達質(zhì)粒pcDNA3.1-SATB1的基礎上，采用CCK-8比色法評估調(diào)控SATB1的表達對RCC細胞增殖能力的影響，應用Transwell侵襲實驗分析RCC細胞侵襲性的變化。
　　結(jié)果：RCC細胞中SATB1 mRNA及其蛋白表達水平顯著高于對照組細胞HK-2(P<0.001)，且SATB1在ACHN、A498及786-O中的表達依次增高。成功構建pGenesil2-SATB1-shRNA和pcDNA3.1-SATB1過表達質(zhì)

3、粒。通過Western blotting和實時定量PCR法證實：shRNA穩(wěn)轉(zhuǎn)組786-O細胞中，SATB1 mRNA及其蛋白表達均顯著降低(P<0.001)；而SATB1過表達組ACHN細胞中，SATB1在mRNA和蛋白水平的表達均顯著升高(P<0.001)。CCK-8研究結(jié)果顯示：SATB1表達下調(diào)可顯著抑制786-O細胞的增殖能力，而SATB1過表達則可明顯促進ACHN細胞的增殖活性，差異均具有顯著的統(tǒng)計學意義(均為P<0.05)

4、。Transwell研究表明：shRNA穩(wěn)轉(zhuǎn)組腎癌細胞786-O的侵襲能力顯著降低(P<0.001)，而pcDNA3.1-SATB1穩(wěn)轉(zhuǎn)組腎癌細胞ACHN的侵襲能力則顯著增強(P<0.001)。
　　結(jié)論：核轉(zhuǎn)錄因子SATB1在RCC細胞中的表達顯著上調(diào)。SATB1基因過表達在腎癌細胞獲得侵襲表型的過程中起關鍵作用，對促進腎癌侵襲、轉(zhuǎn)移具有重要意義。
　　第二部分：SATB1在ccRCC組織中表達的臨床意義及其與EMT之間的

5、相關性研究
　　目的：探討SATB1和EMT標志基因在ccRCC組織中的表達及其相關性。
　　方法：分別采用免疫組織化學(IHC)染色、Western blotting及實時定量PCR法檢測89例ccRCC組織標本中SATB1的表達情況；應用IHC法檢測SATB2及EMT標志基因(E-cadherin、ZEB2、vimentin和fibronectin)在ccRCC組織中的表達，并通過Spearman秩次相關分析法評估其與S

6、ATB1表達之間的相關性。
　　結(jié)果：IHC結(jié)果顯示89例ccRCC組織中SATB1、SATB2、E-cadherin、ZEB2、vimentin和fibronectin蛋白表達陽性率分別為46.1％、42.7％、44.9％、51.7％、37.1％和49.4％。與對照組正常組織相比，腎癌組織中SATB2和E-cadherin的表達水平均明顯下降，而SATB1和ZEB2表達水平則顯著升高，且SATB1高表達與患者腫瘤浸潤深度(P<0

7、.001)、TNM分期(P=0.009)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)(P=0.001)之間具有顯著關聯(lián)。此外，Spearman秩次相關分析表明SATB1表達與ZEB2之間呈顯著正相關(R=0.262,P=0.013)，而與SATB2、E-cadherin之間則呈明顯負相關(R=-0.296,P=0.005;R=-0.427,P<0.001)。
　　結(jié)論：ccRCC組織中，SATB1表達與EMT標志基因蛋白表達密切相關，將二者聯(lián)合進行分析，對于