抗c-Myc納米抗體的淘選、表達及應用.pdf

1、細胞中，存在著一類基因或者是基因家族，其在通常情況下為抑制狀態(tài)或維持較低表達水平，當其在某些因素作用下，基因表達失去控制，細胞的正常生物學性狀會發(fā)生各種改變,逐步轉化成為惡性細胞,最終導致細胞甚至機體癌變。這類基因我們通常稱之為原癌基因(Proto-oncogene)。
　　myc基因家族為原癌基因家族中的一類，主要分為c-myc、n-myc、l-myc三類基因。myc基因家族及其產(chǎn)物主要與調控細胞周期的DNA結合,控制細胞的增殖

2、以及誘導細胞的凋亡。研究認為，腫瘤的發(fā)生與轉移同c-myc基因的激活有密切關系。
　　量子點（QDs）是由II-VI族或III-V族元素組成的半導體材料，屬于納米晶體，受激后能發(fā)射熒光，可用于生物學分析。量子點激發(fā)光譜寬，同時發(fā)射光譜窄并且左右對稱，可以通過改變粒子大小控制熒光發(fā)射波長。與傳統(tǒng)有機熒光染料相比，量子點具有很高的量子產(chǎn)率和抗光漂白能力，而且熒光壽命長，具有良好的生物相容性。因此，量子點熒光技術在生物學領域具有廣闊前景

3、。
　　本研究采用噬菌體展示技術，從羊駝免疫庫中淘選能與c-Myc結合的納米抗體，并將淘選獲得的抗c-Myc納米抗體在大腸桿菌中進行表達，純化的重組抗c-Myc納米抗體經(jīng)量子點標記后，初步用于檢測細胞內c-Myc蛋白的表達情況，主要研究結果如下：
　　1、通過四輪固相淘選，從羊駝c-Myc蛋白免疫文庫中獲得了了11個能特異性結合c-Myc蛋白的克隆，分別為A13、A18、A25、A26、A31、A32、B34、C5、C24、

4、C42、C46，并對這些克隆的親和力大小進行了分析比較。
　　2、選取親和力相對較高的克?。ˋ25和A26），分別將編碼基因克隆至表達載體pET-25b（+），在大腸桿菌表達系統(tǒng)中，使用IPTG誘導表達，SDS-PAGE電泳結果顯示，重組蛋白分子量約20kDa，與預期分子大小相符。
　　3、初步驗證了利用量子點標記重組納米抗體用于細胞內靶標檢測的方法。制備SP2/0細胞爬片，用量子點熒光標記納米抗體，檢測c-Myc蛋白在細胞