大容量肺灌洗家兔肺泡上皮屏障和水通道蛋白1表達(dá)的影響.pdf

1、目的:以家兔為研究對象，模擬臨床大容量肺灌洗(whole lung lavage，WLL)方法對家兔進(jìn)行肺灌洗，觀察肺灌洗對肺泡上皮屏障和水通道蛋白1(AQP1)表達(dá)的影響，灌洗液中加入β2受體激動劑能否促進(jìn)WLL術(shù)后肺泡內(nèi)殘留灌洗液的清除。
　　方法:將15只家兔隨機(jī)分為對照組、肺灌洗組、灌洗+β2受體激動劑組（β2受體組），每組5只。對照組:將家兔在全麻狀態(tài)下行氣管切開嬰兒氣管導(dǎo)管插管，分隔左右肺，右肺自主呼吸，左肺不做灌洗。

2、肺灌洗組:模擬臨床WLL方法將家兔在全麻狀態(tài)下氣管切開行氣管導(dǎo)管插管，分隔左右肺，右肺自主呼吸，左肺用37℃生理鹽水灌洗，每次灌入10mL/kg，每次灌注時間1～2分鐘，引流2～3分鐘，連續(xù)灌洗10次，灌洗液回收率在90％以上。β2受體組:WLL方法同肺灌洗組，但在灌洗液中加入濃度為0.05mg/kgβ2受體激動劑特布它林，三組吸氧濃度均為21％。三組于灌洗前取股動脈血行血?dú)夥治?，灌洗?0min再次取股動脈血行血?dú)夥治觯叛幩兰彝萌?/p>

3、肺灌洗側(cè)組織行蘇木精-伊紅(HE)染色觀察肺組織形態(tài)學(xué)的改變，采用病理評分法評價各組家兔肺組織的病理改變;電子顯微鏡觀察肺泡上皮屏障超微結(jié)構(gòu)的改變;免疫組織化學(xué)染色(SP法)檢測肺組織中AQP1蛋白的表達(dá)，以平均光密度值(OD值)表示AQP1相對表達(dá)量;實時熒光定量PCR法檢測AQP1 mRNA的表達(dá)，以SYBR-greenⅠ作熒光指示劑，檢測AQP1 mRNA的量，采用雙△△Ct法計算各組目的基因的相對表達(dá)量。所得數(shù)據(jù)采用SPSS17

4、.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，各組計量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(x)±s）表示，組間差異顯著性檢驗采用單因素方差分析和q檢驗，兩組間比較采用SNK法檢驗，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果:(1)血?dú)夥治?灌洗前對照組(PaO266.20±3.12，氧合指數(shù)295.62±14.87)、肺灌洗組(PaO265.40±4.84，氧合指數(shù)311.43±23.06)、β2受體組(PaO269.10±12.43，氧合指數(shù)329.05±59

5、.20) PaO2及氧合指數(shù)三組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);大容量肺灌洗后10min家兔的動脈血?dú)夥治鍪?灌洗組(PaO248.98±4.01，氧合指數(shù)233.24±19.09)明顯低于對照組(PaO259.22±2.70，氧合指數(shù)282.00±12.84)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）;β2受體組(PaO253.46±5.63，氧合指數(shù)254.57±26.83)也低于對照組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。(2)肺組

6、織濕/干重比(W/D):灌洗后肺組織的W/D灌洗組(3.62±0.14)和β2受體組(3.42±0.10)明顯高于對照組(3.20±0.17)，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P均＜0.05);但β2受體組W/D低于灌洗組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。(3)肺組織的大體表現(xiàn):灌洗組和β2受體組家兔肺臟均有不同程度的腫脹，且下肺較明顯，質(zhì)量增加，切面可見淡紅色泡沫樣液體溢出;對照組肺組織彈性好，外觀正常，無上述改變。(4)HE染色:對照組肺組織

7、肺泡腔內(nèi)未見水腫液，無肺泡受損及黏膜水腫改變;肺灌洗組和β2受體組家兔肺泡腔和肺間質(zhì)內(nèi)有淡紅色的水腫液，肺泡腔擴(kuò)大。病理評分:灌洗組(7.2±1.483)和β2受體組(5.2±1.095)高于對照組(0.8±0.837)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）;但β2受體組低于灌洗組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。(5)電鏡:對照組肺組織肺泡上皮細(xì)胞間結(jié)構(gòu)完整，緊密連接未見破壞;肺灌洗組和β2受體組家兔肺組織肺泡上皮細(xì)胞間緊密連接有破壞。

8、(6)免疫組織化學(xué):對照組AQP1表達(dá)于支氣管和肺泡周圍的毛細(xì)血管內(nèi)皮及肺泡上皮細(xì)胞，呈棕黃色染色提示AQP1表達(dá)陽性;灌洗組和β2受體組肺泡上皮細(xì)胞AQP1表達(dá)均較對照組增強(qiáng)，β2受體組表達(dá)增強(qiáng)更明顯。肺灌洗組和β2受體組AQP1表達(dá)的OD值分別為(0.504±0.075)、(0.652±0.041)，較對照組(0.354±0.014)明顯增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）;與肺灌洗組比較，β2受體組AQP1表達(dá)的OD值增高，差異

9、有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。(7)實時熒光定量PCR:灌洗組和β2受體組AQP1 mRNA相對表達(dá)量分別為(3.07±0.75)、(4.74±1.14)，明顯高于對照組(1.90±1.09)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）;與灌洗組比較，β2受體組AQP1 mRNA相對表達(dá)量增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論:(1)大容量肺灌洗后家兔存在一定程度的肺損傷。(2)大容量肺灌洗導(dǎo)致家兔肺組織AQP1表達(dá)增加。(3