杭白菊病毒病原鑒定及脫毒苗生物學(xué)性狀與品質(zhì)性狀分析.pdf

1、杭白菊（Chrysanthemun morifolium Ramat.）是浙江省桐鄉(xiāng)市的主要特產(chǎn)，是浙江省八大名藥材“浙八味”之一，近年來(lái)由于病毒病爆發(fā)嚴(yán)重影響了杭白菊的產(chǎn)量和品質(zhì)，為此本文著重展開(kāi)了分離和鑒定危害桐鄉(xiāng)市杭白菊的主要病毒病原，創(chuàng)制了杭白菊脫毒健康種苗，并分析了脫毒對(duì)杭白菊生物學(xué)性狀及品質(zhì)性狀的影響。主要研究結(jié)果如下:
　　(1)調(diào)研了主產(chǎn)區(qū)桐鄉(xiāng)市杭白菊專(zhuān)業(yè)合作社，發(fā)現(xiàn)幾個(gè)重要種植基地病毒感染嚴(yán)重，病株的主要癥狀為葉

2、片斑紋明顯，花葉，分枝少，嚴(yán)重地塊葉片呈褐色斑枯，植株枯死，致使菊花產(chǎn)量下降、品質(zhì)變劣。
　　(2)綜合運(yùn)用病毒粒子形態(tài)、DAS-ELISA檢測(cè)、RT-PCR檢測(cè)及序列測(cè)定等技術(shù)進(jìn)行病原菌鑒定，透射電鏡下觀(guān)察到病株汁液含600～700nm略微彎曲的桿狀病毒粒子;應(yīng)用菊花B病毒(CVB)抗體進(jìn)行DAS-ELISA檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，對(duì)陽(yáng)性結(jié)果進(jìn)行分子水平檢測(cè)發(fā)現(xiàn)CVB外殼蛋白編碼序列長(zhǎng)度為982bp，測(cè)序結(jié)果在NCBI中進(jìn)行BLAST比

3、對(duì)，發(fā)現(xiàn)與報(bào)道的編碼菊花B病毒外殼蛋白的核苷酸序列(GenBank登錄號(hào):EU499736.1)相似度最高為92％，可確定擴(kuò)增片段為菊花B病毒的外殼蛋白基因，明確了侵染浙江省桐鄉(xiāng)杭白菊的病毒病原為CVB。
　　(3)采用“多步分步法”創(chuàng)制脫毒種苗，建立了杭白菊脫毒健康種苗的快速繁殖體系，外植體最佳的消毒處理為75％乙醇30s，0.1％氯化汞12min，成活率為70％;最適宜莖段生長(zhǎng)壯苗的培養(yǎng)基為MS+0.1mg/L6-BA+0.1

4、mg/LNAA，最佳生根培養(yǎng)基為1/2MS+0.1mg/LNAA，生根率為100％;待植株株高為5～6cm，根數(shù)為3～5條，根長(zhǎng)約1cm時(shí)移栽到溫室內(nèi)生長(zhǎng)，成活率可達(dá)100％。在解剖鏡下剝?nèi)?.3～0.5mm無(wú)菌苗莖尖，接種到培養(yǎng)基中進(jìn)行莖尖苗的誘導(dǎo)，莖尖成活率約10％，經(jīng)透射電鏡、RT-PCR及DAS-ELISA等方法檢測(cè)，獲得12％脫除CVB的杭白菊苗。經(jīng)田間的推廣示范發(fā)現(xiàn)脫毒種苗在分枝數(shù)、有效花朵數(shù)、葉綠素相對(duì)含量參數(shù)方面與常規(guī)杭

5、白菊有顯著性差異，脫毒‘早小洋菊’的畝產(chǎn)量達(dá)490.1kg，脫毒‘小洋菊’的畝產(chǎn)量達(dá)1083.3kg，分別增產(chǎn)11％、29％。脫毒‘早小洋菊’、脫毒‘小洋菊’中總黃酮的含量分別為70.41mg/g，63.94mg/g，常規(guī)苗中含量分別為53.44mg/g，43.41mg/g;脫毒‘早小洋菊’、脫毒‘小洋菊’中綠原酸含量分別為2.71mg/g、2.13mg/g，常規(guī)苗中含量分別為1.62mg/g，1.01mg/g，脫毒苗中綠原酸含量高于藥