貴州省蛇源曼氏迭宮絳蟲結(jié)構(gòu)及與宿主相容性的研究.pdf

1、目的：觀察貴州省王錦蛇源曼氏迭宮絳蟲（成蟲和裂頭蚴）超微結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，比較蛇源裂頭蚴與四種宿主的相容性，優(yōu)化裂頭蚴皮層分離條件，并對(duì)皮層蛋白組分進(jìn)行分析。
　　方法：1.采集貴州省安順地區(qū)王錦蛇源裂頭蚴標(biāo)本，進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定。將王錦蛇源裂頭蚴口服法感染狗，飼養(yǎng)1月后剖殺，獲得曼氏迭宮絳蟲成蟲標(biāo)本。成蟲與裂頭蚴標(biāo)本用日立S-3400掃描電鏡觀察其超微結(jié)構(gòu)；2.將檢獲的蛇源裂頭蚴浸泡于10％～30%胎牛血清尿素（1M～4M）皮質(zhì)分離液中，處

2、理1 h～4 h后，觀察皮層分離情況。對(duì)可溶性皮層蛋白進(jìn)行 SDS-PAGE及Western blot分析，篩選最佳皮層分離條件以及特異性蛋白條帶；3.將裂頭蚴感染不同宿主（鼠、雞、豬、犬），進(jìn)行裂頭蚴與宿主相容性的研究。主要觀察指標(biāo)有宿主裂頭蚴的感染率、感染強(qiáng)度、致死率及發(fā)育歷期等。
　　結(jié)果：1.超微結(jié)構(gòu)的觀察。1.1成蟲超微結(jié)構(gòu)成蟲頭節(jié)呈指狀，背、腹面上各有一條縱行的吸槽。因頸部短而粗，使頭節(jié)到頸部的轉(zhuǎn)化不明顯。整個(gè)成蟲表面

3、被微毛所覆蓋，槽內(nèi)面的微毛呈絲狀型，頭節(jié)其余部位、頸部及鏈體表面均密布圓椎狀棘狀型微毛。成節(jié)和孕節(jié)的結(jié)構(gòu)基本相同，節(jié)片背面除微毛外無其他結(jié)構(gòu)，腹面有5條縱行的丘團(tuán)，每個(gè)丘團(tuán)又由許多半球形顆粒組成。在節(jié)片腹面上部中央，從上而下,可見雄性生殖孔、雌性生殖孔及子宮孔。有些節(jié)片可見到陰莖自雄性生殖孔伸出，陰莖呈短圓柱狀。生殖孔周圍由許多生殖乳突圍繞。1.2裂頭蚴超微結(jié)構(gòu)裂頭蚴扁平帶狀，前后二端略膨大，不分節(jié)，但表面有深的不規(guī)則的橫向皺褶。頂端中

4、央有一橫向凹陷，凹陷周圍體壁呈唇狀突起。體表的質(zhì)膜內(nèi)陷形成大小不等的凹窩與溝紋。整個(gè)蟲體體表密布微毛，微毛的長短不一。蟲體前端的微毛為圓椎狀的棘狀型，而體中段的微毛有二種類型，一種為圓椎狀的棘狀型，另一種呈劍狀的棘狀型微毛，數(shù)量較少，鑲嵌在圓椎狀微毛中。蟲體后端的中央也有一橫向凹陷，凹陷周圍體壁也呈唇狀突起，但較前端的扁平。2.皮層分離條件及可溶性皮層蛋白分析2.1皮層分離條件用含20%～30%胎牛血清的2M～3M的尿素溶液分離裂頭蚴的

5、皮層2～3 h，能成功將皮層與實(shí)質(zhì)組織分離開。通過HE觀察，皮層分離發(fā)生在基膜處。2.2可溶性皮層蛋白的分析皮層可溶性蛋白經(jīng)SDS-PAGE共分離出12條蛋白帶；相對(duì)分子質(zhì)量（Mr）范圍在：9.8～178ku，其中Mr24.5、Mr35、Mr50、Mr170ku為高豐度蛋白區(qū)帶；經(jīng)Wester Blotting分析：2條帶(Mr15和Mr35ku)為蛇源曼氏裂頭蚴皮層特異性蛋白條帶，能被感染小鼠血清識(shí)別。3.四種宿主與裂頭蚴的相容性裂頭

6、蚴感染小鼠后，小鼠裂頭蚴的感染率、回收率和致死率分別為100%、54%和7.6%，感染強(qiáng)度為1～5；雞的感染率、回收率和致死率分別42.86%、4.76%和7.6%，感染強(qiáng)度為1～2；所有的豬未能感染成功；狗成蟲的感染率及回收率分別是60%和26%，成蟲的感染強(qiáng)度為3～6。在一只狗的皮下組織中發(fā)現(xiàn)有一條裂頭蚴寄生。
　　結(jié)論：1.不同蟲株會(huì)出現(xiàn)形態(tài)結(jié)構(gòu)的差異，對(duì)正常組織結(jié)構(gòu)的觀察將為蟲株的分類及病原學(xué)診斷奠定基礎(chǔ)。2.尿素能成功分