精子相關(guān)抗原9(SPAG9)在宮頸癌及宮頸上皮內(nèi)瘤變中的表達(dá)及意義.pdf

1、背景:
　　宮頸癌是女性第三常見(jiàn)的惡性腫瘤，在惡性腫瘤死亡率中占第四位，嚴(yán)重威脅女性健康。并且，全球超過(guò)85％宮頸癌新發(fā)及死亡病例發(fā)生于發(fā)展中國(guó)家。宮頸癌的發(fā)生與發(fā)展是一個(gè)多階段、多步驟、復(fù)雜的過(guò)程，從癌前病變發(fā)展為宮頸癌可經(jīng)歷十余年時(shí)間，故宮頸癌是一種可預(yù)防、甚至可治愈的疾病。盡管，近些年來(lái)國(guó)內(nèi)外逐漸普及宮頸癌的篩查工作，雖已使宮頸癌的發(fā)病率、死亡率有明顯下降，但是因?qū)m頸液基細(xì)胞學(xué)檢查特異性以及敏感性不高，并且陰道鏡和宮頸活檢等

2、屬創(chuàng)傷性檢查，也存在漏診的可能。另外，宮頸病變的術(shù)前及預(yù)后監(jiān)測(cè)并不完善，目前尚沒(méi)有一種可靠的腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)。因此，尋找一種能為宮頸病變的早期篩查、臨床診斷及術(shù)后檢測(cè)提供幫助的新型腫瘤標(biāo)志物顯得尤為重要。
　　目的:
　　檢測(cè)精子相關(guān)抗原9(SPAG9)在宮頸癌、宮頸上皮內(nèi)瘤變(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)組織中的表達(dá)，并檢測(cè)SPAG9在宮頸病變患者血清內(nèi)的免疫原性，評(píng)估其作為

3、新宮頸癌血清標(biāo)志物的潛在價(jià)值。
　　方法:
　　1、研究對(duì)象:子宮頸病變組織及正常宮頸組織選取自山東大學(xué)附屬省立醫(yī)院2009年至2012年宮頸手術(shù)或活檢患者標(biāo)本。新鮮子宮頸癌標(biāo)本40例;宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)患者手術(shù)后石蠟標(biāo)本35例、新鮮標(biāo)本7例;對(duì)照組選取20例正常宮頸組織（因非宮頸病變而手術(shù)）。另外，40例子宮頸癌、40例CIN患者血樣均取自須行手術(shù)患者，另收集20例子宮頸癌術(shù)后返院化療患者、20例子宮肌瘤患者及10例

4、健康女性血樣做為對(duì)照。
　　2、研究方法:
　　(1)應(yīng)用免疫組織化學(xué)(IFC)方法，明確SPAG9在各宮頸組織中的表達(dá)定位，通過(guò)對(duì)平均光密度值的檢測(cè)，比較正常宮頸組織、宮頸上皮內(nèi)瘤變組織以及子宮頸癌組織中SPAG9的表達(dá)差異。
　　(2)應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法檢測(cè)正常宮頸組織、CIN組織及宮頸癌組織中SPAG9的表達(dá)，并通過(guò)半定量分析各組間差異。
　　(3)通過(guò)Western Blot方法

5、檢測(cè)正常宮頸組織、CIN組織及宮頸癌組織中SPAG9的蛋白表達(dá)，進(jìn)行半定量分析。
　　(4)應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)10例健康女性、20例子宮肌瘤患者、40例宮頸上皮內(nèi)瘤變患者、40例宮頸癌患者以及20例宮頸癌術(shù)后返院化療、無(wú)復(fù)發(fā)患者的血清標(biāo)本中SPAG9濃度差異。
　　結(jié)果:
　　1、免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，SPAG9主要定位于腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜上，間質(zhì)中則極少量表達(dá)或不表達(dá)。SPAG9在正常宮頸組

6、、宮頸上皮內(nèi)瘤變組及宮頸癌組中的表達(dá)量依次增強(qiáng)，且各組間表達(dá)的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但SPAG9的表達(dá)與宮頸癌臨床病理學(xué)特征，無(wú)論在病理類型、組織學(xué)分型、臨床分期或有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等方面的表達(dá)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2、RT-PCR結(jié)果顯示SPAG9在正常宮頸組織中極少表達(dá)或無(wú)表達(dá)，而在宮頸癌組織中表達(dá)量明顯增高。通過(guò)對(duì)SPAG9mRNA在不同宮頸組織中表達(dá)的半定量分析顯示，在宮頸癌組織中平均表達(dá)量為0.815±0.553，而在正常

7、宮頸組織中為0.008±0.001，兩組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3、Western Blot檢測(cè)SPAG9蛋白在宮頸癌及正常宮頸組織中的表達(dá)趨勢(shì)，與免疫組織化學(xué)以及RT-PCR的結(jié)果一致。半定量分析SPAG9蛋白在宮頸癌組織中平均表達(dá)量為0.929±0.908，正常宮頸組織中平均表達(dá)量?jī)H為0.044±0.032，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4、ELISA結(jié)果示10名健康女性血清中SPAG9平均血清濃度3.2343±1.05

8、79ng/mL，20例子宮肌瘤患者中為3.3561±0.7426ng/mL，兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而在40例宮頸上皮內(nèi)瘤變及40例宮頸癌患者血清中SPAG9的平均表達(dá)量分別為6.7015±3.3101ng/mL、15.1404±10.3839ng/mL，宮頸癌組高于CIN組高于子宮肌瘤及健康女性組，且各組間的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。另外，在20例宮頸癌術(shù)后返院化療、且無(wú)復(fù)發(fā)的患者血清中SPAG9平均濃度為3.6107±1.5069，較術(shù)前