新型軟骨組織工程支架的制備及性能研究.pdf

1、組織工程技術出現(xiàn)于上世紀80年代，它的出現(xiàn)標志著醫(yī)學器官移植開始步入器官再造的新時代。作為組織工程研究的重要分支，軟骨組織工程技術近年來發(fā)展迅速，取得了許多重要的成果，但同時也存在一些關鍵問題亟待解決，其中首要的問題是研制開發(fā)新型載體支架。
　　 本文首次將多聚羥基烷酸類材料羥基丁酸-羥基辛酸共聚酯(PHBHOx)應用到軟骨組織工程載體支架的制備當中，以其為主體材料，復合脫細胞軟骨基質(ACM)進行軟骨組織工程支架的制備，并對支

2、架的各項性能進行檢測和評估，以期制備出各項性能滿足軟骨組織工程要求的支架，為利用組織工程技術修復軟骨損傷拓展新的材料來源。
　　 我們首先在無菌條件下切取豬膝關節(jié)表面透明軟骨，然后采用非離子型去污劑TritonX-100、低滲Tris-HCl以及Dna酶和Rna酶等聯(lián)合進行脫細胞處理并通過HE、Masson和甲苯胺藍染色檢測脫細胞效果。將上述處理過的軟骨薄片低溫粉下粉碎后與PHBHOx以不同比例[0％(對照組)、2％、4％、6％

3、、8％、10％]混合均勻，以事先篩分好的粒徑為100-300um的NaCl晶體作為致孔劑，采用溶劑澆鑄-顆粒瀝濾技術制備支架。之后對所制備支架的孔徑、孔隙率、親水性、降解性、降解液PH值穩(wěn)定性、生物力學強度等性能進行檢測并依據(jù)軟骨組織工程支架標準篩選出性能最優(yōu)支架。分離培養(yǎng)豬關節(jié)軟骨細胞，選取第3代細胞進行細胞-支架體外復合培養(yǎng)試驗，在培養(yǎng)至2周時，利用掃描電鏡觀察軟骨細胞在支架上的黏附生長情況，MTT比色法測定細胞在支架上的存活狀態(tài)并

4、對測定結果做出相應分析。
　　 研究結果顯示，HE染色證明采用聯(lián)合脫細胞方法有效地脫去了軟骨細胞，MASSON和甲苯胺藍染色證明軟骨中細胞外基質成份(膠原和糖胺聚糖)得到了保留。掃描電鏡觀察可見支架里三維連通的海綿狀結構，圖像分析儀測得支架平均孔徑為206.91±52.33um，比重法測得支架孔隙率介于(71.51±4.66)％至(83.53±3.21)％之間，親水性均在100％以上，體外降解實驗表明支架降解性能突出、降解液pH

5、值穩(wěn)定，電子萬能試驗機測得支架生物力學強度介于(3.20±0.41)MPa至(7.90±0.22)MPa之間，且上述性能均可通過調整致孔劑以及材料間的復合比例而改變。利用酶組織消化法提取的豬關節(jié)軟骨細胞，數(shù)量大，成活率高，是一種較為可靠的種子細胞培養(yǎng)方法。軟骨細胞與支架在體外復合培養(yǎng)至2周時，掃描電鏡觀察可見細胞在支架上粘附較為緊密，部分細胞已伸出偽足，在支架上延伸、鋪展，MTT比色法證實軟骨細胞在支架內生長良好。
　　 上述研