貫葉連翹提取純化工藝及指紋圖譜研究.pdf

1、目的:制定貫葉連翹藥材及其提取物中主要指標(biāo)性成分金絲桃素的反相高效液相含量測定方法,從而更有效地控制貫葉連翹藥材及其提取物的質(zhì)量,為貫葉連翹提取物的生產(chǎn)提供科學(xué)依據(jù);以金絲桃素提取率及其含量為指標(biāo),建立貫葉連翹藥材的酶解工藝、溶劑提取工藝、大孔吸附樹脂純化工藝;建立貫葉連翹提取物制備過程中各階段提取物的HPLC指紋圖譜,運用CHROMAP1.5指紋圖譜處理軟件對提取物HPLC指紋圖譜進行處理分析,用以監(jiān)控貫葉連翹提取物提取純化各階段生產(chǎn)

2、工藝及評價貫葉連翹提取物的質(zhì)量。
　　方法:(1)建立貫葉連翹藥材及其提取物中指標(biāo)性成分金絲桃素的HPLC含量測定方法,考察了影響含量測定準(zhǔn)確性的因素,并進行了系統(tǒng)的方法學(xué)考察;(2)以金絲桃素指標(biāo),考察不同溶劑對貫葉連翹的提取效果,篩選出最佳提取溶劑,并優(yōu)化制定出最佳溶劑提取工藝;(3)考察纖維素酶、果膠酶、木聚糖酶、?-葡聚糖酶、復(fù)合酶SPE-007A等不同酶及酶的組合對貫葉連翹酶解,并對酶解后藥材以乙醇提取,同時與貫葉連翹藥

3、材不酶解提取進行比較,按照指標(biāo)性成分金絲桃素提取效果的優(yōu)劣,最終篩選出較好的提取方法與酶解效果較優(yōu)的植物提取用酶與酶的組合,并建立最佳酶的最優(yōu)酶解工藝;(4)以金絲桃素為指標(biāo)考察不同類型的大孔吸附樹脂對貫葉連翹提取物的純化效果,并結(jié)合大孔吸附樹脂的方法純化貫葉連翹提取物,篩選出最佳大孔吸附樹脂,并建立貫葉連翹提取物的最佳大孔吸附樹脂純化方法;(5)分別測定陜西產(chǎn)貫葉連翹藥材溶劑直接提取物,酶解后提取物,酶解并純化后提取物的HPLC指紋圖

4、譜,比較酶解前后及純化前后提取物中主要成分的變化及指標(biāo)性成分金絲桃素含量的變化情況。
　　結(jié)果:(1)建立了貫葉連翹及其提取物的HPLC含量測定方法,金絲桃素在0.0104～0.208μg(r2=0.9999)范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系,其平均加樣回收率為98.9％,RSD為0.54%。結(jié)果表明,所建立的測定方法簡便,重復(fù)性良好。(2)篩選出了提取率高的貫葉連翹提取溶劑-乙醇,并優(yōu)選了乙醇提取貫葉連翹的最佳提取工藝;考察了纖維素酶、

5、果膠酶、木聚糖酶、?-葡聚糖酶、復(fù)合酶SPE-007A等5種酶對貫葉連翹藥材的酶解效果,篩選出對貫葉連翹中金絲桃素提取率較高的酶,并優(yōu)化出了貫葉連翹的最佳酶解工藝。(3)篩選出了對貫葉連翹提取物純化效果較好的LSA-10型大孔吸附樹脂,并系統(tǒng)考察了影響LSA-10純化貫葉連翹提取物的各因素,最終確立了最佳大孔吸附樹脂純化工藝。(4)分別采集了貫葉連翹藥材酶解前后、酶解后大孔樹脂純化貫葉連翹提取物的HPLC色譜圖,進行了方法學(xué)考察,運用C

6、HROMAP1.5指紋圖譜軟件對貫葉連翹提取物HPLC色譜圖進行處理分析,分別建立了共有模式,并針對貫葉連翹提取物制備過程中三個階段的工藝分別建立了HPLC指紋圖譜樣品的識別模式,通過測試各模式指認(rèn)各組內(nèi)與組外的不同樣品驗證所建各模式的指認(rèn)準(zhǔn)確性與相對獨立性,以證明提取純化各階段工藝的穩(wěn)定性與可行性,并最終將所建HPLC指紋圖譜作為陜西產(chǎn)貫葉連翹提取物的質(zhì)量評價與提取純化工藝的監(jiān)控手段。
　　結(jié)論:所建立的金絲桃素的HPLC含量測