杜仲葉總提物雙向調(diào)節(jié)骨代謝平衡機理研究.pdf

1、目的： 研究杜仲葉總提物對體外培養(yǎng)破骨細胞的影響及對大鼠骨髓基質(zhì)細胞向成骨細胞分化的影響，從抑制破骨細胞骨吸收和促進成骨細胞骨形成兩個角度探討杜仲葉總提物防治骨質(zhì)疏松癥的雙向作用機理。 方法： 1．取新生24 h內(nèi)的SD大鼠股骨、脛骨及肱骨分離已分化成熟的破骨細胞。 2．分別以高、中、低濃度的杜仲葉總提物對成熟的破骨細胞進行體外培養(yǎng)，采用抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色計數(shù)破骨細胞數(shù)目，甲苯胺藍染色計數(shù)

2、象牙片上吸收陷窩的數(shù)目。 3．取30 d的SD大鼠股骨及脛骨的骨髓，用全骨髓法貼壁分離篩選骨髓基質(zhì)細胞。 4．分別以高、中、低濃度的杜仲葉總提物對骨髓基質(zhì)細胞進行持續(xù)培養(yǎng)，以不含杜仲葉總提物的DMEM培養(yǎng)液為空白對照，采用Gomori鈣鈷法、茜素紅法染色分別觀察各組堿性磷酸酶（ALP）、鈣結(jié)節(jié)情況，并取各組不同時間點的培養(yǎng)液測定敏感性成骨指標堿性磷酸酶活性。 結(jié)果： 1．高、中、低濃度杜仲葉總提物均減少T

3、RAP染色陽性細胞數(shù)目，也減少骨片吸收陷窩的數(shù)目，與空白對照組比較有顯著性的差異，且高濃度杜仲葉總提物的影響最顯著。 2．高、中、低濃度杜仲葉總提物培養(yǎng)的骨髓基質(zhì)細胞，堿性磷酸酶染色均呈陽性，持續(xù)培養(yǎng)能形成鈣結(jié)節(jié)；高、中、低濃度杜仲葉總提物同空白對照組比較有顯著性的差異，且高濃度杜仲葉總提物的影響最顯著。 3．堿性磷酸酶活性測定結(jié)果為：隨著培養(yǎng)時間的延長，高、中、低濃度杜仲葉總提物與空白對照組的堿性磷酸酶活性均增加，3d

4、時各濃度組與空白對照組間無明顯的差異，但是6d時各濃度組的堿性磷酸酶活性均明顯高于空白對照組。 結(jié)論： 1．在一定濃度范圍內(nèi)，杜仲葉總提物對破骨細胞性骨吸收有明顯地抑制作用。 2．采用全骨髓法可獲得生長性狀穩(wěn)定，增殖速度快，貼壁細胞成活率高的大鼠骨髓基質(zhì)細胞。原代培養(yǎng)過程中，接種后48h首次半量換液，可更大限度的獲得骨髓基質(zhì)細胞。 3．在一定濃度范圍內(nèi)，杜仲葉總提物能促進骨髓基質(zhì)細胞向成骨細胞分化。