新型金屬銅絡(luò)合物的抗腫瘤作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的:研究新型金屬銅絡(luò)合物(N-Cu)的體內(nèi)外抗腫瘤活性及其作用機(jī)制。
　　方法:1.采用MTT法測定新型金屬銅絡(luò)合物對5株人腫瘤細(xì)胞(人卵巢癌細(xì)胞(SKOV3)、人宮頸癌細(xì)胞(Hela)、人乳腺癌細(xì)胞(MCF7)、人食管癌細(xì)胞(EC9706)、人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株(A549))增值的影響。2.對S180腹水瘤小鼠腹腔注射新型金屬銅絡(luò)合物溶液,觀察其對小鼠體重、腹圍、腹水體積、生存期及主要臟器的影響。3.采用流式細(xì)胞儀測定新型金屬

2、銅絡(luò)合物對Hela細(xì)胞周期和凋亡的影響,探討了新型金屬銅絡(luò)合物抗腫瘤活性的作用機(jī)制。4.應(yīng)用了紫外吸收光譜、熒光光譜、Ct DNA熱變形實(shí)驗(yàn)、粘度法、電泳法等不同的方法,研究了新型金屬銅絡(luò)合物與Ct DNA的相互作用方式以及不同條件下對DNA的切割作用,進(jìn)一步探討了新型金屬銅絡(luò)合物具有抗腫瘤活性的作用機(jī)制。
　　結(jié)果:1.體外抗腫瘤活性:新型金屬銅絡(luò)合物對5種人腫瘤細(xì)胞株的增值均呈現(xiàn)出不同程度的抑制。MTT結(jié)果顯示,新型金屬銅絡(luò)合

3、物對SKOV3、Hela、MCF7、EC9706、A549的半數(shù)抑制濃度(IC50)作用24h的分別為:32.10±1.84、168.39±3.24、100±2+4.81、49.05±1.91、24.35±2.76μg/ml;新型金屬銅絡(luò)合物對SKOV3、Hela、MCF7、EC9706、A549的半數(shù)抑制濃度(IC50)作用48h的分別為:19.65±3.04、15.7±0.14、82.35±3.04、33.2±1.98、21.65±

4、2.62μg/ml。2.體內(nèi)抗腫瘤活性:新型金屬銅絡(luò)合物對S180腹水瘤模型小鼠的腫瘤具有一定抑制作用。能減小S180腹水模型小鼠的腹圍和減少瘤體積;延長S180腹水模型小鼠的生存期;對小鼠臟器無影響,病理切片顯示出治療組小鼠的肝有明顯好轉(zhuǎn)。3.抗腫瘤的作用機(jī)制研究(1)周期實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:經(jīng)不同濃度的新型金屬銅絡(luò)合物溶液(10.00-100.00μg/ml)作用細(xì)胞48小時(shí)后,Hela細(xì)胞的S期細(xì)胞的比例顯著下降,G0/G1期細(xì)胞的比例

5、明顯增加,且G0/G1期細(xì)胞數(shù)具有一定的濃度效應(yīng)關(guān)系,說明新型金屬銅絡(luò)合物溶液將Hela細(xì)胞分裂阻滯于G0/G1期,最終導(dǎo)致細(xì)胞的凋亡。(2)凋亡實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:不同濃度的新型金屬銅絡(luò)合物溶液(10.00-100.00μg/ml)作用細(xì)胞24、48h后,Hela細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生了明顯變化。未加藥組的細(xì)胞核均一、結(jié)構(gòu)完整;給藥組細(xì)胞隨著給藥濃度的增大分別出現(xiàn)了:細(xì)胞體積縮小、變圓、脫落、破碎等現(xiàn)象。流式結(jié)果顯示,Hela細(xì)胞出現(xiàn)了明顯的凋亡。

6、濃度為10.00、50.00、100.00μg/ml時(shí),凋亡率比例分別為3.19、11.01、24.10％。(3)與Ct DNA作用的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:在新型金屬銅絡(luò)合物的作用下,小牛胸腺DNA(Ct DNA)的紫外光譜出現(xiàn)了減色效應(yīng)和明顯的紅移現(xiàn)象。DNA-EB體系的熒光光譜產(chǎn)生了熒光強(qiáng)度降低的現(xiàn)象。熱變性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,DNA的Tm略有升高。電泳的試驗(yàn)結(jié)果顯示,新型金屬銅絡(luò)合物可以切割超螺旋質(zhì)粒DNA。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,新型金屬銅絡(luò)合物的抗