川南高氟地區(qū)人群膝骨性關節(jié)炎患病狀況及影響因素的抽樣調查研究.pdf

1、目的：通過本研究了解川南高氟地區(qū)人群膝骨性關節(jié)炎的患病狀況，探討雌激素受體基因PvuⅡ和XbaⅠ核酸限制性內切酶多態(tài)性及其他危險因素與川南高氟地區(qū)人群膝關節(jié)骨性關節(jié)炎的相關性，探討影響川南高氟地區(qū)人群膝關節(jié)骨性關節(jié)炎的因素。 方法：采用分層隨機抽樣方法，對川南高氟地區(qū)古藺縣121個行政村中的6個行政村81名當?shù)鼐用窕枷ス切躁P節(jié)炎情況進行調查，并抽取問卷，提取血液標本，測定其跟骨超聲骨密度值。對部分患者行膝關節(jié)X線檢查及膝關節(jié)鏡檢

2、查治療。分析雌激素受體基因多態(tài)性與膝OA的相關性。依據(jù)調查結果應用SPSS13．0軟件包對膝關節(jié)骨性關節(jié)炎的危險因素進行分析。采用美國風濕病學會（American College of Rheumatology，ACR）膝骨性關節(jié)炎診斷標準和Lequesne制定的膝骨性關節(jié)炎嚴重性指數(shù)（The Index of Severity of Osteoarthritis，ISOA）進行評分，調查篩選出41例膝骨性關節(jié)炎患者及40例對照組，取E

3、DTA抗凝外周靜脈血200μl，離心柱法提取人血白細胞基因組DNA，用聚合酶鏈反應限制性片段長度多態(tài)性（Restriction fragment leng—th polymorphism—polymerase chain reaction，PCR—RFLP）的方法鑒定雌激素受體的基因型：1．目的片段的PCR擴增：PCR總體系30μl，含5μl基因組DNA、dNTP2μl，超長鏈Taq酶2U，10×Buffer3μl。應用全自動基因擴增儀

4、，PCR反應參數(shù)為：95℃預變性3min，95℃1min→55℃1min→72℃5min，擴增30個循環(huán)，72℃7min，4℃保存擴增產物，通過2%瓊脂糖凝膠電泳，溴化乙錠（Ethidium Bromide，EB）染色，紫外燈下檢測。2．PCR產物酶切：對PCR產物進行酶切，酶切總體系20μl，其中PCR產物10μl，限制性內切酶PvuⅡ、XbaⅠ各5μl及相應內切酶緩沖液2μl，在37℃恒溫下水浴消化20h，分別取PvuⅡ、XbaⅠ酶

5、切產物各6μl與加6×上樣Buffer2μl，點樣至含EB0．2μg/ml的2%瓊脂糖凝膠中，同時用100bpDNA Ladder Maker做對照，100V，60mA電泳30min，透射紫外燈下觀察電泳結果、拍照。3．判斷基因型：PCR—RFLP結果用小寫字母表示具有酶切位點，命名為p或x，用大寫字母表示存在點突變而沒有酶切位點，命名為P或X。使用PvuⅡ酶切可區(qū)分出3種基因型：PP型（終產物為1．3 kb大小的條帶），Pp型（終產物

6、為1．3 kb，850 bp，450 bp大小的3條帶），pp型（終產物為850 bp，450 bp大小的2條帶），使用XbaⅠ進行酶切可以區(qū)分出XX型（終產物為1．3 kb），Xx型（終產物為1．3 kb，910 bp，390 bp大小的3條帶），XX型（終產物為910 bp，390 bp大小的2條帶）。（圖5）分析雌激素受體基因多態(tài)性與膝骨性關節(jié)炎的關系及各基因型在病例組與對照組的分布。 結果：川南高氟地區(qū)膝OA的患病率為5

7、0．6%，遠高于平均水平，年齡（P=0．049）、吸煙（P=0．009）和氟斑牙情況（P=0．032）與膝OA有顯著相關性。81例全部擴增出ER基因。檢測出6種酶切多態(tài)性，3種PvuⅡ酶切基因型：PP、Pp、pp；3種XbaⅠ酶切基因型：XX、Xx、xx。其中PP15例，Pp40例，pp26例。XX5例、Xx24例、xx52例。3種PvuⅡ酶切基因型和3種xbaⅠ酶切基因型可組成9種復合基因型，只檢出8種復合基因型，復合基因型ppXX未

8、檢出。在對照組中PP、Pp、pp型各有5例、23例、12例，分別占對照組的12．5%、57．5%、30%。病例組中PP、Pp、pp型各有10例、17例、14例，分別占對照組的24．4%、41．5%、34．1%。PP型和pp型在病例組中的分布高于對照組，Pp型在病例組中的分布頻率低于對照組，但差別沒有統(tǒng)計學意義，P>0．05。XbaⅠ酶切多態(tài)性在病例組中XX、Xx、xx型各有2例、11例、28例，分別占病例組人群的4．9%、26．8%、6

9、8．3%；在對照組中XX、Xx、xx型各有3例、13例、24例，分別占對照組人群的7．5%、32．5%、60%。XX型和Xx型在病例組中的分布低于對照組，xx型在病例組中的分布頻率高于對照組，但差別沒有統(tǒng)計學意義，P>0．05。 結論：1．川南高氟地區(qū)膝骨關節(jié)炎主要為氟性膝關節(jié)炎。2．年齡、吸煙情況、氟斑牙情況與川南高氟地區(qū)膝OA有較強相關性。3．ER基因多態(tài)性與川南高氟地區(qū)膝OA尚未發(fā)現(xiàn)有明確相關性。4．除結合當?shù)胤乐畏前Y的