基因修飾的BMSCs復合膠原-殼聚糖-膠原-納米羥基磷灰石仿生支架體內(nèi)構建組織工程骨軟骨的研究.pdf

1、目的:
　　探討TGF-β1和BMP-2基因修飾的骨髓間充質干細胞（BMSCs）復合新型仿生支架材料膠原-殼聚糖/膠原-納米羥基磷灰石修復關節(jié)軟骨和軟骨下骨損傷的可行性，為組織工程化骨軟骨的臨床應用提供實驗依據(jù)。
　　方法:
　　聯(lián)合應用密度梯度離心法及貼壁培養(yǎng)法分離、培養(yǎng)、純化豬BMSCs，應用TGF-β1和BMP-2重組慢病毒轉染的BMSCs，熒光顯微鏡觀察轉染率；將轉染后細胞分層復合到膠原-殼聚糖/膠原-納米羥基

2、磷灰石支架（Col-CS/nHAC-PLA）材料上，掃描電子顯微鏡（SEM）檢測支架的孔隙率、孔徑和BMSCs在支架上的粘附生長情況，制作豬股骨髁骨軟骨損傷的動物模型，并應用復合TGF-β1和BMP-2基因修飾的BMSCs的支架進行修復。分別在12W、24W取材，觀察修復組織的大體情況、蘇木精-伊紅染色、堿性磷酸酶染色、阿爾新藍過碘酸雪夫染色、Ⅱ型膠原免疫組化染色情況，評價軟骨和軟骨下骨損傷的修復情況。
　　結果:
　　1、

3、聯(lián)合應用密度梯度離心法和貼壁培養(yǎng)法可以成功分離、培養(yǎng)、純化豬BMSCs，TGF-β1和BMP-2重組慢病毒可成功轉染的BMSCs，熒光顯微鏡下觀察到熒光蛋白表達，間接反映TGF-β1和BMP-2蛋白的表達。
　　2、Col-CS/nHAC-PLA經(jīng)SEM檢測，其孔隙率都達到80％左右，CS孔徑約為30-100μm之間，HA孔徑約為50-120μm之間，符合BMSCs生長所需微環(huán)境，SEM還觀察到BMSCs在支架上粘附生長的情況。<

4、br>　　3、成功制作豬膝關節(jié)骨軟骨損傷動物模型，并應用組織工程骨軟骨進行修復。12W時，大體及組織學觀察示細胞復合組新生軟骨較單純材料組厚且表面較平整，新生軟骨和軟骨下骨連續(xù)性好，成骨細胞胞漿中棕色的堿性磷酸酶顆粒較多，新生軟骨基質連續(xù)性好，染成棕色的Ⅱ型膠原明顯。24W時，大體及組織學觀察示細胞復合組較單純材料組新生軟骨完整且較透明，新生軟骨和軟骨下骨連續(xù)性好且排列規(guī)則，成骨細胞及胞漿中棕色的堿性磷酸酶顆粒多，新生軟骨基質連續(xù)性好且