羧乙基殼聚糖-納米羥基磷灰石三維支架構(gòu)建組織工程氣管的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　 探討羧乙基殼聚糖/納米羥基磷灰石三維支架構(gòu)建組織工程氣管的可行性
　　 一、通過原代軟骨細(xì)胞的體外培養(yǎng)和鑒定，探討其成為組織工程氣管種子細(xì)胞的可行性。
　　 二、制備羧乙基殼聚糖/納米羥基磷灰石(NCECS/n-HA)三維支架構(gòu)，通過體外種植軟骨細(xì)胞，觀察軟骨細(xì)胞在支架表面的生長情況，探討NCECS/n-HA三維泡沫型支架構(gòu)建組織工程氣管的可行性。
　　 方法：
　　 (1)通過兩步

2、酶消化法獲得兔耳廓原代軟骨細(xì)胞并進(jìn)行傳代培養(yǎng)。(2)通過免疫組織化學(xué)、免疫熒光以及甲苯胺藍(lán)染色對獲得的軟骨細(xì)胞實(shí)施Ⅱ型膠原、糖胺聚糖檢測，進(jìn)行鑒定。(3)通過真空冷凍干燥法制得NCECS/n-HA三維泡沫型支架，并用掃描電鏡(SEM)檢測支架表面的成孔率和孔徑大小。(4)體外將第2代軟骨細(xì)胞種植到NCECS/n-HA支架表面共同培養(yǎng)一周，SEM檢測軟骨細(xì)胞在支架表面的生長情況。
　　 結(jié)果：
　　 (1)通過胰酶和Ⅱ型膠

3、原酶聯(lián)合消化法可以獲得相對較純凈的軟骨細(xì)胞，差速貼壁法和機(jī)械刮除法有助于原代軟骨細(xì)胞的進(jìn)一步純化。(2)Ⅱ型膠原免疫組織化學(xué)、Ⅱ型膠原免疫熒光以及甲苯胺藍(lán)染色顯示獲得的細(xì)胞可以特異性地分泌Ⅱ型膠原和糖胺聚糖，證實(shí)獲得的細(xì)胞即為軟骨細(xì)胞。(3)通過真空冷凍干燥法制成的NCECS/n-HA支架表面成孔率高達(dá)90％，孔徑為70-200μm，適合軟骨細(xì)胞生長的需要。(4)軟骨細(xì)胞和NCECS/n-HA支架共培養(yǎng)一周后，SEM顯示軟骨細(xì)胞可以在支