羧乙基殼聚糖-納米羥基磷灰石三維支架構建組織工程氣管的實驗研究.pdf

1、目的：
　　 探討羧乙基殼聚糖/納米羥基磷灰石三維支架構建組織工程氣管的可行性
　　 一、通過原代軟骨細胞的體外培養(yǎng)和鑒定，探討其成為組織工程氣管種子細胞的可行性。
　　 二、制備羧乙基殼聚糖/納米羥基磷灰石(NCECS/n-HA)三維支架構，通過體外種植軟骨細胞，觀察軟骨細胞在支架表面的生長情況，探討NCECS/n-HA三維泡沫型支架構建組織工程氣管的可行性。
　　 方法：
　　 (1)通過兩步

2、酶消化法獲得兔耳廓原代軟骨細胞并進行傳代培養(yǎng)。(2)通過免疫組織化學、免疫熒光以及甲苯胺藍染色對獲得的軟骨細胞實施Ⅱ型膠原、糖胺聚糖檢測，進行鑒定。(3)通過真空冷凍干燥法制得NCECS/n-HA三維泡沫型支架，并用掃描電鏡(SEM)檢測支架表面的成孔率和孔徑大小。(4)體外將第2代軟骨細胞種植到NCECS/n-HA支架表面共同培養(yǎng)一周，SEM檢測軟骨細胞在支架表面的生長情況。
　　 結果：
　　 (1)通過胰酶和Ⅱ型膠

3、原酶聯(lián)合消化法可以獲得相對較純凈的軟骨細胞，差速貼壁法和機械刮除法有助于原代軟骨細胞的進一步純化。(2)Ⅱ型膠原免疫組織化學、Ⅱ型膠原免疫熒光以及甲苯胺藍染色顯示獲得的細胞可以特異性地分泌Ⅱ型膠原和糖胺聚糖，證實獲得的細胞即為軟骨細胞。(3)通過真空冷凍干燥法制成的NCECS/n-HA支架表面成孔率高達90％，孔徑為70-200μm，適合軟骨細胞生長的需要。(4)軟骨細胞和NCECS/n-HA支架共培養(yǎng)一周后，SEM顯示軟骨細胞可以在支