脾胃濕熱證濕、熱偏重量化的實驗研究.pdf

1、目的: 脾胃濕熱證是臨床常見的證候，其在病變過程中存在濕偏重、熱偏重及濕熱并重等病理變化，在臨床診斷上比較困難。本課題通過觀察大鼠的一般狀態(tài)、尿液中的水通道蛋白2（AQP2）、血漿淋巴細胞熱休克蛋白70（HSP70）、胃竇P物質（SP）及生長抑素（SS）、胃及十二指腸的病理變化等指標，探討脾胃濕熱證濕、熱偏重的本質和它們之間的差異，為脾胃濕熱證濕、熱偏重的量化提供實驗依據；通過觀察在三仁湯、白虎加蒼術湯的干預下脾胃濕熱證濕偏重、

2、熱偏重大鼠模型一般狀況及一系列實驗指標的變化，從不同角度揭示三仁湯、白虎加蒼術湯的作用機理。 方法 1．藥物與飼料 ①附子干姜湯的藥物組成：制附子、干姜②三仁湯的藥物組成：苦杏仁、法半夏、滑石、薏苡仁、白豆蔻、厚樸、通草、淡竹葉③白虎加蒼術湯的藥物組成：蒼術、粳米、知母、石膏、甘草。 高糖高脂飼料：普通飼料中混入12%豬油，8%蜂蜜加工而成。 2．分組 SPF級SD大鼠40只，隨機分為5

3、組，每組8只，雌雄各半，即正常對照組、濕偏重組、三仁湯組、熱偏重組和白虎加蒼術湯組。 3．造模 在肥甘飲食、酒傷、濕熱環(huán)境、病原微生物的綜合因素作用下，建立脾胃濕熱證的濕偏重型、熱偏重型的動物模型：①正常對照組：在20～28℃溫度，50%～70%相對濕度的環(huán)境下，以普通混合飼料喂養(yǎng)：②濕偏重組：高糖高脂飼料+造模箱+白酒+大腸桿菌；③三仁湯組：高糖高脂飼料+造模箱+白酒+大腸桿菌+三仁湯；④熱偏重組：高糖高脂+造模箱+附

4、子干姜煎劑+大腸桿菌；⑤白虎加蒼術湯組：高糖高脂+造模箱+附子干姜煎劑+大腸桿菌+白虎加蒼術湯。 4．觀察及檢測指標 對比觀察實驗大鼠造模前后的一般狀態(tài)、體重、肛溫、24小時尿量、大便性狀等的變化。用ELISA法檢測大鼠尿液中的AQP2、流式細胞儀檢測血漿淋巴細胞HSP70、放射免疫法檢測胃竇勻漿SP及SS的含量。光鏡下觀察大鼠的胃、十二指腸的病理變化。 5．統(tǒng)計學方法 用SPSS軟件（13．0版）處理，

5、實驗結果的數據類型為計量資料，各數據以均數±標準差（x±s）表示。體重、體溫采用重復測量的方差分析進行比較；24小時尿量、AQP2含量、HSP70、SP及SS含量采用One-Way ANOVA對各組實驗結果進行方差分析，組間多重比較用LSD法檢驗，以P<0．05為有顯著性差異。 結果 1．大鼠的一般狀態(tài) 正常對照組：該組大鼠在喂養(yǎng)4周期間，毛色光澤、食欲好、活動正常，大便正常。濕偏重組、熱偏重組：隨著造模時間的推

6、移，大部分動物出現(xiàn)倦怠，嗜臥懶動，反應遲鈍，毛發(fā)蓬松，顏色枯槁；從造模第7天開始，均出現(xiàn)大便溏瀉或粘膩，濕偏重組更嚴重；進入造模箱后，大便溏瀉或粘膩癥狀加重，漸見肛周污穢。三仁湯組、白虎加蒼術湯組：大鼠造模后出現(xiàn)與模型組相同的癥狀，經三仁湯、白虎加蒼術湯灌服后，癥狀有所減輕。 2．體重、體溫、24小時尿量變化 隨著造模時間的延長，進入造模箱后4個模型組的體重下降，不同時間點模型組的體重均低于正常對照組（P<0．01），經

7、三仁湯、白虎加蒼術湯的治療后體重恢復正常增長水平。模型組大鼠進入造模箱后體溫升高，灌喂大腸桿菌后體溫急劇上升，與正常對照組比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0．05）；經三仁湯、白虎加蒼術湯的治療后體溫恢復正常，而濕偏重組、熱偏重組體溫無顯著改善。濕偏重組、熱偏重組24小時尿量較正常對照組顯著減少（P<0．01），三仁湯組、白虎加蒼術湯組24小時尿量與正常對照組比較差異無顯著性差異（P>0．05）。 3．實驗室指標檢測 濕偏重組

8、、熱偏重組尿液AQP2的含量顯著高于正常對照組（P<0．01），而且濕偏重組比熱偏重組增高顯著（P<0．01）。三仁湯組、白虎加蒼術湯組AQP2含量恢復正常水平，與正常對照組比較差異無顯著性意義（P>0．05）。 濕偏重組、熱偏重組血漿淋巴細胞HSP70表達高于正常對照組（P<0．01），而且熱偏重組比濕偏重組增高顯著（P<0．01）。三仁湯組、白虎加蒼術湯組HSP70表達恢復正常水平，與正常對照組比較差異無顯著差異（P>0．0

9、5）。 濕偏重組、熱偏重組大鼠胃竇SP、SS較正常對照組顯著降低（P<0．01）；并且濕偏重組SP、SS水平低于熱偏重組（P<0．05）。三仁湯組、白虎加蒼術湯組SP、SS含量恢復正常水平，與正常對照組比較無顯著差異（P>0．05）。 4．胃、十二指腸病理切片 正常對照組胃粘膜層可見少量炎癥細胞，粘膜下層無組織水腫，十二指腸絨毛上皮較完整。濕偏重組、熱偏重組大鼠胃及十二指腸病理切片無較大差異，均可見：（1）胃粘膜

10、層有大量中性粒細胞、嗜酸性粒細胞浸潤，血管擴張充血；胃粘膜下層組織水腫，中性粒細胞、嗜酸性粒細胞浸潤顯著；（2）十二指腸可見絨毛上皮細胞脫落，大量炎癥細胞滲出。三仁湯組、白虎加蒼術湯組切片均可見胃粘膜層炎癥細胞減少，血管無擴張充血，粘膜下層無組織水腫，十二指腸絨毛上皮較完整，僅見少量炎癥細胞浸潤。 結論 實驗結果顯示，在肥甘飲食、濕熱環(huán)境、病原微生物、酒傷、內濕、熱的綜合作用下，可成功復制脾胃濕熱證的濕偏重型、熱偏重型的

11、動物模型。濕偏重組、熱偏重組尿液AQP2的含量增高，而且濕偏重組比熱偏重組增高顯著，可見其向外利水的生理作用出現(xiàn)異常；AQP2可作為脾胃濕熱證“濕”的形成、“濕”的量化的一個重要指標。濕偏重組、熱偏重組血漿淋巴細胞HSP70表達顯著增加，而且熱偏重組比濕偏重組增高顯著；這表明大鼠在復合因素的作用下，機體處于自我調節(jié)、自我保護狀態(tài)，HSP70可作為量化脾胃濕熱證濕、熱偏重的重要指標之一。濕偏重組、熱偏重組大鼠胃竇SP、SS含量降低，濕偏重

12、組SP、SS水平更低于熱偏重組；SP、SS的含量能客觀地反映胃腸功能的狀態(tài)，這亦能解釋濕偏重證、熱偏重證臨床所表現(xiàn)的消化系統(tǒng)癥狀。濕偏重組、熱偏重組大鼠胃、十二指腸出現(xiàn)炎癥病變，表明脾胃濕熱證臨床所表現(xiàn)的癥狀是有其形態(tài)結構基礎的。 三仁湯、白虎加蒼術湯可能存在以下作用：1）能恢復由復合因素所致的濕偏重證、熱偏重證動物模型的一般狀態(tài)；2）調節(jié)尿液中AQP2的含量，恢復機體正常的向外利水功能；3）降低熱應激所導致的HSP70增高的作