脾胃濕熱證濕偏重量化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的： 脾胃濕熱證是臨床常見的證候，其在病變過程中存在濕偏重、熱偏重及濕熱并重等病理變化，在I臨床診斷上比較困難。為了深入研究脾胃濕熱證的本質(zhì)，本課題以SD大鼠作為研究對(duì)象，通過肥甘飲食、酒傷、濕熱環(huán)境、病原微生物等多種因素及清香散、三仁湯的治療反證等手段來研究脾胃濕熱證、濕偏重證的大鼠模型。從大鼠的一般狀況及一系列實(shí)驗(yàn)指標(biāo)量的變化，探討脾胃濕熱證、濕偏重證的本質(zhì)及清香散、三仁湯的療效，為脾胃濕熱證、濕偏重證的量化提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

2、 方法： 1.藥物與飼料清香散的藥物組成：香薷、地膽草、丹皮、赤芍、醋柴胡、炒黃芩、云苓、白術(shù)、甘草。三仁湯的藥物組成：苦杏仁、法半夏、滑石、薏苡仁、白豆蔻、厚樸、通草、淡竹葉。高糖高脂飼料：普通飼料中混入12％豬油，8％蜂蜜加工而成。 2.分組 SPF級(jí)SD大鼠40只，雌雄各半，隨機(jī)分為5組，即正常對(duì)照組、濕熱組、清香散組、濕偏重組和三仁湯組，每組8只。 3.造模 在肥甘飲食、酒傷、濕熱

3、環(huán)境、病原微生物的綜合因素作用下，建立脾胃濕熱證、濕偏重證的動(dòng)物模型： ①正常對(duì)照組：在20～28℃溫度，50％～70％相對(duì)濕度的環(huán)境下，以普通混合飼料喂養(yǎng)； ②濕熱組：高糖高脂飼料+造模箱+大腸桿菌； ③清香散組：高糖高脂飼料+造模箱+大腸桿菌+清香散； ④濕偏重組：高糖高脂飼料+造模箱+白酒+大腸桿菌； ⑤三仁湯組：高糖高脂飼料+造模箱+白酒+大腸桿菌+三仁湯。 4.觀察及檢測(cè)指標(biāo)對(duì)比

4、觀察實(shí)驗(yàn)大鼠造模前后的一般狀態(tài)、飲食量、飲水量、體重、肛溫、24小時(shí)尿量、大便性狀等的變化。用ELISA法檢測(cè)大鼠尿液中的水通道蛋白2(AQP2)、流式細(xì)胞儀檢測(cè)血漿淋巴細(xì)胞熱休克蛋白70(HSP70)、放射免疫法檢測(cè)胃竇勻漿P物質(zhì)(SP)及生長(zhǎng)抑素(SS)的含量。大鼠處死后，迅速取出胃、十二指腸組織，置于10％甲醛溶液固定，石蠟包埋制成切片，HE染色，光鏡下觀察。 5.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法用SPSS軟件(11.5版)處理，實(shí)驗(yàn)結(jié)果的數(shù)據(jù)

5、類型均為記量資料，各數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示。飲食量、飲水量、體重、體溫采用重復(fù)測(cè)量的方差分析進(jìn)行比較；24小時(shí)尿量、AQP2含量、HSP70、SP及SS含量采用One-WayANOVA對(duì)各組實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行方差分析，組間多重比較用LSD法檢驗(yàn)，以P<0.05為有顯著性差異。 結(jié)果： 1.大鼠的一般狀態(tài)正常對(duì)照組：該組大鼠在喂養(yǎng)4周期間，毛色光澤、食欲好、活動(dòng)正常，大便成形。濕熱組、濕偏重組：隨著造模時(shí)間的推移，大部

6、分動(dòng)物出現(xiàn)倦怠，嗜臥懶動(dòng)，反應(yīng)遲鈍，毛發(fā)蓬松，顏色枯槁；從造模第7天開始，均出現(xiàn)大便溏瀉或粘膩；進(jìn)入造模箱后，大便溏瀉或粘膩癥狀加重，漸見肛周污穢，濕偏重組表現(xiàn)最明顯。清香散組、三仁湯組：大鼠造模后出現(xiàn)與模型組相同的癥狀，經(jīng)灌服清香散、三仁湯煎劑后，癥狀有所減輕。 2.飲食量、飲水量、體重、體溫、24小時(shí)尿量變化隨著造模時(shí)間的延長(zhǎng)，模型組大鼠的飲食量、飲水量均呈進(jìn)行性下降；經(jīng)清香散、三仁湯的治療后飲食量、飲水量均有所增加。進(jìn)入造

7、模箱后4個(gè)模型組的體重下降，不同時(shí)間點(diǎn)模型組的體重均低于正常對(duì)照組(P<0.01)，經(jīng)清香散、三仁湯的治療后體重恢復(fù)正常增長(zhǎng)水平。模型組大鼠進(jìn)入造模箱后體溫升高，灌喂大腸桿菌后體溫急劇上升，與正常對(duì)照組比較差異有顯著性意義(P<0.05)：經(jīng)清香散、三仁湯的治療后體溫恢復(fù)正常，而濕熱組、濕偏重組體溫?zé)o顯著改善。濕熱組、濕偏重組24小時(shí)尿量較正常對(duì)照組顯著減少(P<0.001)，清香散組、三仁湯組24小時(shí)尿量與正常對(duì)照組比較無顯著差異(P

8、>0.05)。 3.實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)檢測(cè)濕熱組、濕偏重組尿液AQP2的含量顯著高于正常對(duì)照組(P<0.001)，而且濕偏重組比濕熱組增加更顯著(P<0.01)。清香散組、三仁湯組AQP2含量恢復(fù)正常水平，與正常對(duì)照組比較無顯著差異(P>0.05)。 濕熱組、濕偏重組血漿淋巴細(xì)胞HSP70表達(dá)高于正常對(duì)照組(P<0.001)，而且濕熱組比濕偏重組增加更顯著(P<0.01)。清香散組、三仁湯組HSP70表達(dá)恢復(fù)正常水平，與正常對(duì)照

9、組比較無顯著差異(P>0.05)。 濕熱組、濕偏重組大鼠胃竇SP、SS含量較正常對(duì)照組顯著降低(P<0.001)；濕熱組與濕偏重組比較，SP的含量?jī)烧咧g無顯著差異(P>0.05)，濕熱組SS的含量則更低于濕偏重組(P<0.01)。清香散組、三仁湯組SP、SS含量恢復(fù)正常水平，與正常對(duì)照組比較無顯著差異(P>0.05)。 4.胃、十二指腸病理切片正常對(duì)照組胃粘膜層可見少量炎癥細(xì)胞，粘膜下層無組織水腫，十二指腸絨毛上皮較完

10、整。濕熱組、濕偏重組大鼠胃及十二指腸病理切片無較大差異，均可見： (1)胃粘膜層有大量中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，血管擴(kuò)張充血：胃粘膜下層組織水腫，中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)顯著； (2)十二指腸可見絨毛上皮細(xì)胞脫落，大量炎癥細(xì)胞滲出。清香散組、三仁湯組切片均可見胃粘膜層炎癥細(xì)胞減少，血管無擴(kuò)張充血，粘膜下層無組織水腫，十二指腸絨毛上皮較完整，僅見少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。 結(jié)論： 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在肥甘飲食、

11、酒傷、濕熱環(huán)境、病原微生物的綜合作用下，可成功復(fù)制脾胃濕熱證、濕偏重證的動(dòng)物模型。濕熱組、濕偏重組尿液AQP2的含量增加，而且濕偏重組比濕熱組增加更顯著，可見其向外利水的生理作用出現(xiàn)異常；AQP2可作為脾胃濕熱證“濕”的形成、濕的量化的一個(gè)重要指標(biāo)。濕熱組、濕偏重組血漿淋巴細(xì)胞HSP70表達(dá)增加，而且濕熱組比濕偏重組增加更顯著；這表明大鼠在復(fù)合因素的作用下，機(jī)體處于自我調(diào)節(jié)、自我保護(hù)狀態(tài)，HSP70可作為量化脾胃濕熱證濕、熱偏重的重要指

12、標(biāo)之一。濕熱組、濕偏重組大鼠胃竇SP、SS含量降低，濕熱組與濕偏重組比較，SP的含量?jī)烧咧g無顯著差異，濕熱組SS的含量則更低于濕偏重組；SP、SS的含量能客觀地反映胃腸功能的狀態(tài)，這亦能解釋濕熱證、濕偏重證臨床所表現(xiàn)的消化系統(tǒng)癥狀。濕熱組、濕偏重組大鼠胃、十二指腸出現(xiàn)炎癥病變，表明脾胃濕熱證臨床所表現(xiàn)的癥狀是有其形態(tài)結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)的。 清香散、三仁湯可能存在以下作用： 1)能改善由復(fù)合因素所致的濕熱證、濕偏重證動(dòng)物模型的一般