小兒再發(fā)性腹痛的脾胃濕熱證與腸道微生態(tài)關(guān)系的研究.pdf

1、再發(fā)性腹痛(recurrent abdominal pain，RAP)是嚴重影響小兒身心健康的兒科臨床最常見的臨床疾病之一。現(xiàn)代醫(yī)學尚未闡明RAP的發(fā)病機制，西藥對RAP的療效也不理想。臨床實踐發(fā)現(xiàn)中醫(yī)藥治療RAP均有一定的特點和優(yōu)勢。RAP在臨床上表現(xiàn)出不同的證型特點，在嶺南地區(qū)脾胃濕熱證患兒比較多見。 一、文獻研究: 1．小兒再發(fā)性腹痛的現(xiàn)代醫(yī)學認識RAP的定義 最早由英國學者Apley和Naish提出，即發(fā)

2、作性的腹痛，病程至少3個月以上，病程中至少有3次以上的腹痛發(fā)作，發(fā)作嚴重時可影響小兒正常的活動，而在發(fā)作間歇期，表現(xiàn)正常。國內(nèi)外的多項研究都發(fā)現(xiàn)，其發(fā)病率高，雖器質(zhì)性因素引起者不多，但由于反復發(fā)作，長期持續(xù)，嚴重影響患兒的身心健康及其家庭的正常生活。 現(xiàn)代醫(yī)學對于RAP發(fā)病機制的認識尚未明確，胃腸動力功能失調(diào)、小腸通透性改變、幽門螺桿菌感染、自主神經(jīng)系統(tǒng)功能失調(diào)、心理因素、內(nèi)臟高敏感性等被認為可能與RAP的發(fā)病相關(guān)，但目前還沒有

3、能得到大多數(shù)學者贊同的假說。 對于RAP 的治療，國內(nèi)外學者們先后嘗試應用H<,2>受體阻滯劑、5-HT 受體阻滯劑、促動力藥、微生態(tài)制劑、植物制劑、飲食療法、行為療法等，但能證明在RAP治療中有效的藥物或治療措施并不多。 近年來，隨著對胃腸功能性疾病研究的深入，多國專家工作組制定了羅馬Ⅱ標準，對于 RAP 這類疾病重新進行了定義，但臨床實際也發(fā)現(xiàn)其存在一些嚴重的缺陷，Von Bayer 和 Walker 對 RAP 定

4、義進行了修訂，Christensen強調(diào)“上部”和“下部”癥狀區(qū)分的重要性，并據(jù)此為RAP分型。筆者分析了這些觀念的變遷，并提出了自己對RAP定義、范圍的看法。 2．小兒再發(fā)性腹痛的中醫(yī)藥研究 現(xiàn)存中醫(yī)古典文獻中雖然并無類似“再發(fā)性腹痛”的概念，然而，不少文獻中對小兒腹痛的病因病機、診治方法及方藥選擇的闡述卻為后人治療再發(fā)性腹痛建立了理論和實踐基礎。近二十年來，各地的中醫(yī)藥學者對RAP的病因病機和辨證論治都做了大量的研究

5、，嘗試應用溫中行氣法、消食導滯法、運脾和胃法、健脾補氣法、調(diào)和肝脾法、清熱祛濕法及外治、針灸推拿療法等治療RAP，取得了不錯的療效，筆者分析了這些文獻，發(fā)現(xiàn)不同地區(qū)RAP的證型分布可呈現(xiàn)不同的特點，可能由于氣候、飲食及小兒生理等方面的特點，嶺南地區(qū)很多RAP患兒表現(xiàn)出脾胃濕熱的證候特點。 3．腸道微生態(tài)及其與胃腸道功能性疾病、脾胃濕熱證的關(guān)系 人體的胃腸道棲息著大量微生物，相互間保持共生或拮抗關(guān)系，構(gòu)成了宿主小生境特定的

6、微生態(tài)系統(tǒng)，當受宿主及外環(huán)境影響，平衡遭到破壞，就出現(xiàn)菌群失調(diào)，使宿主致病。研究發(fā)現(xiàn)腸道微生態(tài)的失調(diào)與多種胃腸道疾病的發(fā)病相關(guān)，近年來其與胃腸道功能性疾病的關(guān)系受到重視，但迄今尚少見有小兒胃腸道功能性疾病特別是RAP與腸道微生態(tài)關(guān)系的研究報道。導師勞紹賢教授等在對既往研究分析總結(jié)的基礎上，提出胃腸微生態(tài)平衡是脾主運化的基礎，微生態(tài)失衡可導致脾胃運化功能失調(diào)，水濕內(nèi)停，濕聚生熱，使胃腸道內(nèi)環(huán)境變化，表現(xiàn)出脾胃濕熱證的臨床證候。通過對以慢性

7、胃炎、腹瀉型IBS等為代表的胃腸道疾病的胃腸道微生態(tài)的相關(guān)指標及證候指征變化的研究，發(fā)現(xiàn)在上述胃腸道疾病的脾胃濕熱證中，患者的腸道不僅存在菌群失調(diào)，而且與脾虛證之間存在差異。這些開創(chuàng)性的研究為從微生態(tài)角度研究脾胃濕熱證奠定了良好的基礎。但是研究也發(fā)現(xiàn)了傳統(tǒng)的通過菌培養(yǎng)、顯微鏡下菌細胞記數(shù)的方法所存在的缺陷，對實驗技術(shù)的改進提出了新的要求。 4．熒光定量PCR技術(shù)分子生物學技術(shù)的發(fā)展 使腸道微生態(tài)的研究方法取得了很大的進步

8、。本論文實驗所采用的實時熒光定量PCR (FQ-PCR)技術(shù)具有定量范圍寬，特異性強，操作快速，技術(shù)簡單、安全等諸多優(yōu)點，是對腸道特定菌群定量的理想方法。 5、研究背景及研究思路 RAP的臨床表現(xiàn)除了腹痛外，也常伴隨大便次數(shù)及性狀改變、腹脹、食量減少等，這些癥狀在其他已被證實與腸道菌群失調(diào)相關(guān)的胃腸道疾病中同樣存在，而微生態(tài)制劑治療RAP的臨床療效也提示腸道微生態(tài)可能與RAP的發(fā)病相關(guān)。糞便標本中雙歧桿菌、腸桿菌含量及其

9、比值(B/E值)對于反映腸道微生態(tài)平衡有重要價值，故本項研究選擇其作為檢測指標。既往研究所發(fā)現(xiàn)的脾胃濕熱證中腸道菌群變化的特點是否在小兒RAP的研究中得到驗證，也是本項研究的重要目的。 二、實驗研究: 1、研究目的：研究小兒再發(fā)性腹痛的脾胃濕熱證與腸道微生態(tài)的關(guān)系. 2、研究方法：研究對象為24例6～12歲再發(fā)性腹痛(RAP)患兒，其中脾胃濕熱證組12例，脾虛證組12例，另選12例同年齡段的正常健康兒童為對照組，

10、應用基于Taqman 技術(shù)的實時熒光定量PCR法，對研究對象糞便標本中的腸道厭氧菌代表——雙歧桿菌(Bifidobacteria)和需氧菌代表——腸桿菌 (Escherichiacoli)DNA進行熒光定量，比較各組間糞便標本中相應微生態(tài)檢測指標的變化及其與RAP主要臨床癥狀和脾胃濕熱證主要臨床證候的關(guān)系。 3、研究結(jié)果：RAP 患兒病例組糞便標本中的雙歧桿菌含量顯著低于正常兒童組(P<0.01)，而腸桿菌含量則顯著高于正常兒童

11、組(P<0.01)，B/E值也顯著低于正常兒童組 (P<0.01)。腹痛程度與B/E值之間有比較明顯的負相關(guān)關(guān)系(相關(guān)系數(shù)=-0.838，P=O)，大便次數(shù)增加、大便稀爛程度與雙歧桿菌的含量都有比較明顯的負相關(guān)關(guān)系(相關(guān)系數(shù)=-0.752，P=0及相關(guān)系數(shù)=-0.725，P=0)，腹脹頻率與雙歧桿菌的含量呈強負相關(guān)關(guān)系 (相關(guān)系數(shù)=-0.931，P=0)。另一方面，脾胃濕熱證組的雙歧桿菌和腸桿菌含量均顯著高于脾虛組(P<0.01及 P<

12、0.05)，B/E 值也較脾虛證組高 (P<0.01)；脾胃濕熱證組雙歧桿菌與腸桿菌含量之間有強正相關(guān)關(guān)系 (相關(guān)系數(shù)=0.916，P=0)，而脾虛證組兩者間則無顯著相關(guān)關(guān)系 (相關(guān)系數(shù)=0.416，P=0.179)；脾胃濕熱證組腹痛程度與B/E值之間有比較明顯的負相關(guān)關(guān)系(相關(guān)系數(shù)=-0.772，P=0.003)，而脾虛證組兩者間則無顯著相關(guān)關(guān)系(相關(guān)系數(shù)=-0.462，P=0.131)；脾胃濕熱證組大便次數(shù)增加與雙歧桿菌含量之間有比

13、較明顯的負相關(guān)關(guān)系(相關(guān)系數(shù)=-0.753，P=0.005)，與脾虛證組中兩者間的關(guān)系近似(相關(guān)系數(shù)=-0.825，P=0.001)；脾胃濕熱證組大便稀爛程度與雙歧桿菌含量之間有比較明顯的負相關(guān)關(guān)系(相關(guān)系數(shù)=-0.768，P=0)，與脾虛證組中兩者間的關(guān)系也近似(相關(guān)系數(shù)=-0.892，P=0.001)；脾胃濕熱證組腹脹頻率與雙歧桿菌含量之間有強負相關(guān)關(guān)系(相關(guān)系數(shù)=-0.928，P=0)，與脾虛證組中兩者間的關(guān)系近似(相關(guān)系數(shù)=-0

14、.933，P=0)，但脾胃濕熱證組腹脹頻率與腸桿菌含量之間也有比較明顯的負相關(guān)關(guān)系(相關(guān)系數(shù)=-0.876，P=0)，而脾虛證組兩者之間則無顯著相關(guān)關(guān)系(相關(guān)系數(shù)=-0.476，P=0.118)；脾胃濕熱證組食量減少與雙歧桿菌含量之間僅有弱負相關(guān)關(guān)系(相關(guān)系數(shù)=-0.611，P=0.035)，而脾虛證組兩者間則有比較明顯的負相關(guān)關(guān)系(相關(guān)系數(shù)=-0.883，P=0)；脾胃濕熱證組舌苔黃膩程度與B/E 值之間也有比較明顯的負相關(guān)關(guān)系(相關(guān)

15、系數(shù)=-0.749，P=0.005)。 4、研究結(jié)論： (1)小兒RAP患兒存在腸道微生態(tài)失調(diào)；在主要臨床癥狀中，腹痛程度與B/E 值下降相關(guān)，大便次數(shù)增加、大便稀爛程度及腹脹頻率與雙歧桿菌含量減少相關(guān)。 (2)脾胃濕熱證與脾虛證組的腸道菌群失調(diào)表現(xiàn)出不同的特點，與主要證候的相關(guān)性也不一致：較諸脾虛證，脾胃濕熱證表現(xiàn)出雙歧桿菌與腸桿菌含量的相關(guān)性高，B/E值與腹痛程度、腸桿菌含量與腹脹頻率的相關(guān)性高也是脾胃濕熱證

16、較諸脾虛證不同的腸道菌群變化特點；而雙歧桿菌含量與食量減少的相關(guān)性高則是脾虛證與脾胃濕熱證不同的特點；此外，脾胃濕熱證也表現(xiàn)出舌苔黃膩程度與腸道菌群失調(diào)的相關(guān)性。 論文最后分析了研究的不足之處，并展望了今后的研究方向，主要有： (1)從臨床研究的角度，可以考慮將整個小兒胃腸功能性疾病視為一“疾病簇”，研究其各種臨床表現(xiàn)與可能相關(guān)的客觀指標的關(guān)系。 (2)除糞便標本外，利用腸鏡技術(shù)同時檢測腸道粘膜不同部位的菌群，可