兩種藥劑刺激灰飛虱和褐飛虱生殖的生理生化及分子機(jī)制研究.pdf

1、灰飛虱和褐飛虱（屬半翅目、飛虱科）是水稻的重要害蟲，除直接刺吸為害造成損失外，灰飛虱還傳播水稻條紋葉枯和水稻黑條矮縮等病毒，造成水稻產(chǎn)量嚴(yán)重?fù)p失。三唑磷是一種典型引起害蟲再猖獗現(xiàn)象的殺蟲劑。井岡霉素是防治水稻紋枯病的抗生素類殺菌劑，由于毒性低，殘留低，成本低等特點(diǎn)，很容易被濫用。目前已發(fā)現(xiàn)井岡霉素噴霧處理和點(diǎn)滴處理均能刺激褐飛虱生殖。因此本文以灰飛虱和褐飛虱為研究對(duì)象，以闡明這兩種飛虱受農(nóng)藥處理后生殖機(jī)制的變化。
　　1、三唑磷處

2、理后灰飛虱蛋白質(zhì)組學(xué)分析
　　為了研究三唑磷處理后對(duì)灰飛虱生殖的影響及灰飛虱再猖獗機(jī)制，利用iTRAQ技術(shù)對(duì)三唑磷處理后灰飛虱進(jìn)行了蛋白組學(xué)分析，共鑒定到6198個(gè)蛋白質(zhì)，其中差異蛋白有217個(gè)（上調(diào)56個(gè)，下調(diào)161個(gè)）。本次分析共得到118條pathway，表中共列出18條與生殖有關(guān)的pathway。通過pathway注釋與富集分析，篩選出三唑磷處理顯著上調(diào)的長鏈脂肪酸輔酶A連接酶(FACL)進(jìn)行RNAi以進(jìn)一步證實(shí)該基因在藥

3、劑刺激生殖中的作用。
　　2、干擾長鏈脂肪酸輔酶A連接酶FACL對(duì)灰飛虱生殖的影響
　　先對(duì)灰飛虱FACL基因進(jìn)行克隆，得到全長序列。接著利用飼喂法對(duì)三唑磷(TZP)噴霧處理的灰飛虱進(jìn)行RNA干擾，形成干擾處理TZP+dsFACL，隨后進(jìn)行iRNA干擾實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示取食含有dsFACL人工飼料的灰飛虱的生殖力顯著下降，灰飛虱產(chǎn)卵量下降73.9％，產(chǎn)卵歷期減少8.9天，雌蟲壽命減少7.9天。生理生化測(cè)定結(jié)果表明，dsFACL處

4、理后體內(nèi)蛋白質(zhì)下降4.7％，甘油下降19.9％及體重下降13.6％，因此我們認(rèn)為FACL是三唑磷刺激灰飛虱生殖的重要相關(guān)基因。
　　3、井岡霉素處理后的褐飛虱卵母細(xì)胞發(fā)育的變化
　　過去藥劑刺激褐飛虱生殖有許多報(bào)道，但藥劑處理對(duì)卵母細(xì)胞生長和發(fā)育的影響不清楚。因此，本研究通過透射電子顯微鏡(TEM)觀察卵母細(xì)胞變化和激素水平(保幼激素(JH)和20-羥基蛻皮激素(20E))的變化。TEM觀察顯示，與對(duì)照卵母細(xì)胞相比，JGM處