新鮮骨髓吸出物直接種植支架材料構(gòu)建組織工程韌帶的可行性研究.pdf

1、目的:種子細胞與支架材料復(fù)合培養(yǎng)是構(gòu)建組織工程韌帶的基本方法,但是種子細胞體外分離、培養(yǎng)、傳代等步驟費時、費力,延長了組織工程韌帶的構(gòu)建周期,應(yīng)用于臨床無疑增加了患者的住院周期及治療費用,我們查閱了國內(nèi)外文獻,少有提及關(guān)于應(yīng)用新鮮骨髓吸出物直接種植于支架材料構(gòu)建組織工程韌帶的研究報告,但是有關(guān)于應(yīng)用新鮮骨髓吸出物直接注射入關(guān)節(jié)內(nèi)前交叉韌帶(ACL)部分損傷局部來修復(fù)韌帶損傷的報導(dǎo),因此我們假設(shè)新鮮骨髓吸出物直接種植于支架材料同樣可以促進

2、種子細胞的粘附、增殖、分化及分泌細胞外基質(zhì)(ECM)等,并且效果不劣于以往分離培養(yǎng)BMSCs種植支架的效果,通過評價此兩種細胞種植方法來探討應(yīng)用新鮮骨髓吸出物直接種植支架材料構(gòu)建組織工程韌帶的可行性,并試圖找到一種新的更為簡單易行且效果確切的細胞種植方法,同時評價絲素纖維/小腸粘膜下層(SIS)復(fù)合物作為韌帶組織工程支架的可行性。
　　方法:構(gòu)建絲素纖維/小腸粘膜下層(SIS)復(fù)合支架材料;提取SD大鼠新鮮骨髓2ml,均分為A,B

3、兩份;A組:新鮮骨髓吸出物1ml直接種植于前述支架材料上為骨髓種植組;B組:提取骨髓通過全骨髓法體外分離純化、培養(yǎng)至第三代的BMSCs種植于相同支架材料為細胞種植組;另以未復(fù)合任何成分的支架作為對照組C組,檢測三組材料細胞體外生物相容性,細胞粘附情況及增殖活性、Ⅰ型、Ⅲ型膠原分泌量,然后通過標準化重建家兔橫斷之前交叉韌帶方式將A組材料植入動物體內(nèi),4周后取材,評價骨髓種植組材料體內(nèi)生物相容性。
　　結(jié)果:骨髓種植組孵育4h細胞粘附

4、密度顯著高于細胞種植組;骨髓種植組各時間點細胞增殖率均顯著高于細胞種植組;骨髓種植組及細胞種植組Ⅰ型、Ⅲ型膠原分泌量均顯著高于對照組,但骨髓種植組及細胞種植組兩組間Ⅰ型、Ⅲ型膠原分泌量未見顯著性差異;骨髓種植組材料植入體內(nèi)4周未引起致死性免疫排斥反應(yīng)及嚴重炎癥反應(yīng),未見明顯韌帶再生及血管化。
　　結(jié)論:新鮮骨髓吸出物直接種植支架材料可見細胞在材料上的粘附、增殖及細胞外基質(zhì)的分泌,且體內(nèi)短期生物相容性可;同時前期材料生物力學(xué)測定證實