TNF-α對哮喘小鼠肺泡灌洗液中LTD4、LTE4水平和肺組織中CysLTR1表達(dá)的影響.pdf

1、目的：以哮喘小鼠模型為研究對象,觀察腫瘤壞死因子-α(Tumornecrosisfactor-α,TNF-α)是否參與調(diào)控其肺泡灌洗液中LTD4、LTE4含量變化及肺組織中半胱氨酰白三烯受體1(Cysteinylleukotrienereceptor1,CysLTR1)表達(dá)情況。
　　方法：將48只健康雌性Balb/c小鼠,隨機分為六組:正常組(A組),哮喘模型組(B組),低劑量TNF-α腹腔注射給藥哮喘組(C1組,0.1μg/k

2、g),高劑量TNF-α腹腔注射給藥哮喘組(C2組,0.4μg/kg,),低劑量TNF-α霧化吸入給藥哮喘組(D1組,0.1μg/kg),高劑量TNF-α霧化吸入給藥哮喘組(D2組,0.4μg/kg),每組分別為8只。建立哮喘動物模型,在末次激發(fā)后處死小鼠,取其肺泡灌洗液和肺組織,酶聯(lián)免疫吸附劑測定(ELISA)檢測肺泡灌洗液中LTD4和LTE4含量水平,蘇木精—伊紅染色法(HE染色)、免疫組織化學(xué)法(IHC)、實時免疫熒光定量PCR(Q

3、PCR)和蛋白質(zhì)免疫印跡法(WesternBlot)檢測肺組織中CysLTR1表達(dá)情況。
　　結(jié)果：(1)肺組織HE染色病理切片顯示哮喘組和TNF-α干預(yù)組有明顯氣道炎癥改變;(2)BALF中各組LTD4含量分別為(19.28±2.34)μg/L、(24.45±3.17)μg/L、(25.93±6.63)μg/L、(31.63±4.18)μg/L、(26.04±5.98)μg/L、(31.06±5.77)μg/L,干預(yù)組均高于正常

4、對照組和哮喘模型組(P<0.05),高低劑量組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);各組LTE4含量分別為(40.00±2.71)ng/L、(46.90±3.91)ng/L、(52.16±2.73)ng/L、(53.41±5.01)ng/L、(50.41±4.70)ng/L、(52.26±4.70)ng/L。干預(yù)組均高于正常對照組和哮喘模型組(P<0.05),但不同劑量組之間差異不顯著(P>0.05)(3)BALF各組EOS計數(shù)情況為(

5、0.01±0.00)×106/L、(1.76±0.80)×106/L、(2.80±0.27)×106/L、(3.47±0.60)×106/L、(2.68±0.47)×106/L、(3.58±0.54)×106/L。干預(yù)組EOS數(shù)目顯著增加,但C1組和D1組之間、C2組和D2組之間差異不顯著,無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)(4)IHC法測定各組CysLTR1陽性細(xì)胞表達(dá)計數(shù)分別為:22.899±1.236、26.333±3.240、33.2

6、22±4.585、51.888±6.988、39.010±5.232、52.222±6.593。其中B組和C1組之間、C2組和D2組之間差異沒有統(tǒng)計性,其余任意兩組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)(5)免疫組織熒光PCR法檢測各組的CysLTR1基因表達(dá)情況為0.688±0.206、1.648±0.534、3.822±1.585、5.888±0.988、4.010±1.232、6.136±1.287,其中C1組和D1組之間、C2組和

7、D2組之間差異沒有統(tǒng)計性,其余任意兩組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)(6)Westernblot法檢測各組的CysLTR1蛋白相對密度分別為0.797±0.081、1.422±0.17、1.784±0.210、2.448±0.096、2.023±0.058、2.933±0.034其中B組和C1組、C2組和D2組之間差異沒有統(tǒng)計性,,其余任意兩組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論：(1)TNF-α引起肺內(nèi)炎性介質(zhì)