甘蔗根際假單胞菌的分離鑒定及其對甘蔗的促生作用.pdf

1、甘蔗是世界主要的能源作物和糖料作物，廣西是甘蔗的主產(chǎn)區(qū)，年甘蔗糖產(chǎn)量約占全國的70％。然而廣西蔗區(qū)土壤肥力低，氮肥施用量高，不僅造成高成本還會污染環(huán)境。通過接種促生固氮菌而降低氮肥施用量，從而降低甘蔗種植成本，是一種節(jié)能環(huán)保的有效途徑。本研究從甘蔗根際土壤中分離了一批促生假單胞菌，對其16S rRNA基因，nifH固氮基因和抗生素基因進(jìn)行了克隆測序及鑒定，并通過Rep-PCR指紋圖譜分析技術(shù)揭示了細(xì)菌個體間在遺傳上的親緣關(guān)系，根據(jù)細(xì)菌的

2、促生特性及對甘蔗病原真菌的拮抗作用，篩選出優(yōu)良菌株CY4和CN11，結(jié)合BIOLOG技術(shù)，檢測了優(yōu)良菌株的代謝多樣性，同時結(jié)合GFP標(biāo)記技術(shù)檢測了其在甘蔗中的定殖能力，并用該優(yōu)良菌株接種了兩個不同甘蔗品種，證實了其能促進(jìn)甘蔗的生長，用15N稀釋技術(shù)證實了其對甘蔗具有聯(lián)合固氮的能力。主要研究結(jié)果如下:
　　1.從甘蔗根際土壤分離到250株根際細(xì)菌，篩選得到100株優(yōu)良促生菌，經(jīng)16SrDNA序列分析顯示，有30個菌株屬于假單胞菌屬。

3、
　　2.30株假單胞菌均具有多種促生特性，其中26株具有良好的溶解無機(jī)磷的能力，20株具有分泌嗜鐵素的能力，12株具有分泌氨的能力，13株具有分泌氰化氫的能力，18株能以ACC為唯一氮源生長，IAA分泌量在13.12～312.07μg mL-1（添加色氨酸）和12.92～23.24μg mL-1(不添加色氨酸)，固氮酶活性在6.16～108.30μmol C2H2 h-1 mL-1，ACC脫氨酶活性在15.13～77.0 mol

4、 mg-1 h-1。真菌拮抗實驗表明，14株抗甘蔗黑穗病病原菌，11株抗甘蔗鳳梨病病原菌。
　　3.利用PCR技術(shù)對30株假單胞菌的nifH基因和抗生素相關(guān)基因進(jìn)行分子檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)有10株菌株的基因組DNA中能擴(kuò)增出大小約為360 bp的固氮酶nifH基因，4株能擴(kuò)增出大小約為1.15 kb的吩嗪-1-羧酸PCA基因，5株能擴(kuò)增出大小約為786 bp的吡咯菌素PRN基因，9株能擴(kuò)增出大小約為587 bp的氫氰酸HCN基因。

5、>　　4.利用GFP標(biāo)記技術(shù)證實優(yōu)良菌株CY4和CN11均能在甘蔗組培苗中定殖。采用室內(nèi)盆栽試驗，分別比較了優(yōu)良促生菌株CY4和CN11接種對不同固氮特性的兩個甘蔗品種GT11和GXB9生長生理、內(nèi)源激素和固氮效率的影響。結(jié)果表明，接種促生假單胞菌CY4和CN11均能不同程度地促進(jìn)甘蔗植株生長，顯著增加其株高和鮮重，同時也能在一定程度上提高甘蔗內(nèi)源激素的含量及固氮效率。
　　本試驗篩選獲得30株具有良好抗病或促生作用的假單胞菌，尤