納米銀涂層抗菌塑料支架治療膽漏實驗研究.pdf

1、背景與目的：膽漏(biliaryleakage)常發(fā)生在膽道或膽道鄰近臟器的損傷之后?？邕^乳頭括約肌將內(nèi)支架置入膽管，可以降低膽管壓力，減少膽汁外漏，從而達到治療膽漏的目的。但支架置入膽管常見并發(fā)癥是膽管炎、支架阻塞。早期的研究中發(fā)現(xiàn)，阻塞的支架中可以見到大量的細菌菌落。使用目前材料制作的支架及附件均無抗菌作用。研究證明低濃度的銀離子對微生物具有殺滅作用。降低銀顆粒的尺寸使其達到納米級，可大大提高其抗菌活性。膽管納米銀涂層抗菌塑料支架的

2、應(yīng)用未見相關(guān)報道。本實驗擬制備膽管納米銀涂層塑料支架，通過體外實驗及動物實驗探討其抗菌性能及治療膽漏效果，以期為膽漏治療提供一種具有抗菌作用的新型支架，為其進一步臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。
　　材料和方法：1）通過化學(xué)氧化還原法，以膽管聚四氟乙烯支架為載體，硝酸銀為原料，制備膽管納米銀涂層塑料支架，通過掃描電鏡（SEM）、透射電鏡（TEM）、X射線能譜分析(EDXA)等技術(shù)檢測納米銀涂層微觀形態(tài)和化學(xué)成分；通過掃描隧道顯微鏡（STM）

3、檢測納米銀涂層塑料膽管支架的彈性系數(shù)和摩擦系數(shù)；2）通過定性及定量實驗探討納米銀涂層塑料支架對腸道代表菌群大腸桿菌抗菌活性；采用SEM觀察納米銀涂層塑料支架干預(yù)大腸桿菌粘附性能；3）8只健康巴馬小型豬為研究對象，全麻下行腹腔鏡手術(shù)，距膽囊管根部0.5-1.0cm處離斷膽囊管，膽囊管殘端開放，剝離切除膽囊；通過術(shù)前、術(shù)后24小時監(jiān)測血常規(guī)、肝功；術(shù)后24小時行ERC；死亡動物及時解剖，存活動物術(shù)后48小時處死解剖觀察膽囊管殘端等方法綜合判

4、斷腹腔鏡下造?？尚行?；4）40只健康巴馬小型豬用于研究。腹腔鏡下建立膽漏動物模型，隨機分為3組，內(nèi)鏡下豬膽管置入膽管納米銀涂層聚四氟乙烯支架（n=15)、普通膽管聚四氟乙烯支架（n=15)、對照組（造模后常規(guī)抗炎治療，n=10）。及時解剖術(shù)后死亡動物，了解死亡原因。術(shù)前及術(shù)后隨訪抽血檢測血常規(guī)、肝功；術(shù)后10天、20天隨訪處死各組1/2存活動物,通過透視了解支架位置，無菌操作取出支架，支架剖開進行細菌培養(yǎng)；通過SEM觀察支架各段表面菌斑

5、情況并比較；通過光學(xué)顯微鏡觀察豬十二指腸乳頭部、膽總管各段組織病理學(xué)變化并比較。
　　結(jié)果：1）成功制備膽管納米銀涂層聚四氟乙烯支架，納米顆粒大小在5-80nm。納米銀涂層僅含有Ag；在一定范圍內(nèi)，納米銀涂層（0.5-5um）厚度增加，支架彈性系數(shù)（楊氏模量）增大，摩擦系數(shù)減小；2）定性抗菌實驗：普通膽管支架周圍沒有形成抑菌圈；納米銀膽管支架周圍可見有抑菌圈，直徑為6.47±0.74mm。2組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（p﹤0.05）；

6、定量抗菌實驗：長0.5cm，直徑8.5Fr支架與106CFU/ml及104CFU/ml大腸桿菌菌懸液接觸處后，隨著培養(yǎng)時間的延長，實驗組菌懸液（膽管納米銀涂層塑料支架）菌落數(shù)逐漸下降，接觸6小時，106CFU/ml及104CFU/ml菌懸液中大腸桿菌被幾乎全部被殺死，抗菌率達到100％；對照組菌懸液（普通膽管塑料支架）菌落數(shù)逐漸升高。SEM觀察：膽管納米銀涂層塑料支架具有較強的干預(yù)大腸桿菌粘附作用；3）腹腔鏡下能充分暴露膽囊、膽囊管、膽

7、囊動脈，顯示膽囊與肝臟及膽囊管與膽總管的解剖關(guān)系。與術(shù)前相比，術(shù)后24小時白細胞、中性粒細胞、直接膽紅素明顯升高（p﹤0.05）。8只實驗豬7只距膽囊管根部0.5-1.0cm處離斷膽囊管，1只距膽囊管根部約2cm處離斷膽囊管；8只實驗豬行ERC,7只造影劑明顯外漏,1只造影劑外漏不明顯；4）40頭實驗豬成功造模、30只內(nèi)鏡下置入支架，10只對照觀察。支架組3只實驗豬術(shù)后20-38小時內(nèi)死亡，解剖死亡原因為膽總管穿孔。對照組10只術(shù)后5天

8、內(nèi)全部死亡，死亡原因膽汁性腹膜炎伴感染。對照組死亡率與2支架組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（p﹤0.05）；術(shù)后10天，2支架組白細胞水平均較術(shù)前明顯增高（p﹤0.05），術(shù)后20天，普通支架組白細胞水平較術(shù)前明顯增高（p﹤0.05），納米銀支架組較術(shù)前無明顯變化（p＞0.05）；術(shù)后10天、20天，所有實驗豬支架內(nèi)容物細菌培養(yǎng)菌均陽性，比較無差異（p＞0.05）；2組均出現(xiàn)膽總管穿孔，支架異位，比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（p＞0.05）；掃描電鏡

9、觀察，納米銀支架及普通支架表面均有數(shù)量不等的炎性附著物或結(jié)晶體黏附在支架表面，細菌分布其中。納米銀支架表面粘附細菌明顯少于普通支架。組內(nèi)比較，下段膽管支架表面粘附細菌較中段、上段膽管支架多；光學(xué)顯微鏡觀察豬十二指腸乳頭部、膽總管各段組織病理學(xué)變化，發(fā)現(xiàn)納米銀支架組、普通支架組膽管粘膜上皮不同程度缺失，壁內(nèi)可見血管擴張充血，炎細胞浸潤。但普通支架組膽管全層炎細胞浸潤更為明顯，部分切片可見膿腫形成。
　　結(jié)論：1）通過化學(xué)氧化還原法，