納米銀對(duì)糞腸球菌抗菌作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、糞腸球菌是根管治療失敗病例的優(yōu)勢(shì)菌和主要致病菌。糞腸球菌具有較強(qiáng)的滲透能力，能夠進(jìn)入根管峽部、不規(guī)則區(qū)及牙本質(zhì)小管內(nèi)，在根管內(nèi)多以生物膜的形式存在。生物膜的形成可明顯提高糞腸球菌的耐藥性，以致目前臨床常用的根管消毒藥物難以有效抑制和殺滅糞腸球菌。探尋安全有效的抗菌劑以抑制糞腸球菌生物膜形成和殺滅已形成生物膜的糞腸球菌，是提高根管治療成功率的途徑之一。納米藥物具有量子尺寸效應(yīng)和表面效應(yīng)等特性，其吸附位點(diǎn)與作用位點(diǎn)較多，對(duì)細(xì)菌等致病微生物有

2、較強(qiáng)的抗菌作用。納米銀抗菌作用強(qiáng)、抗菌譜廣、安全性良好，在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。納米銀在口腔修復(fù)及充填材料等方面的研究和應(yīng)用已逐步展開(kāi)，但在根管消毒中的應(yīng)用研究國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)少見(jiàn)報(bào)道。納米銀溶液對(duì)糞腸球菌的有效作用濃度尚不明確，納米銀溶液能否干預(yù)糞腸球菌對(duì)牙本質(zhì)的粘附從而抑制糞腸球菌生物膜的形成，對(duì)牙本質(zhì)表面糞腸球菌生物膜的殺菌作用如何，這些問(wèn)題均有待闡明。本實(shí)驗(yàn)就上述問(wèn)題進(jìn)行研究，為探尋新的根管消毒藥物以提高根管治療成功率提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。<

3、br>　　 目的：檢測(cè)納米銀溶液對(duì)糞腸球菌的有效作用濃度，探討納米銀溶液干預(yù)糞腸球菌對(duì)牙本質(zhì)的粘附從而抑制糞腸球菌生物膜形成的作用，研究納米銀溶液對(duì)牙本質(zhì)表面糞腸球菌生物膜的殺菌作用并明確其有效作用時(shí)間，為探尋新型有效的根管消毒藥物以提高根管治療成功率提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：⑴將糞腸球菌置于MBECTM P&G Assay中培養(yǎng)24h建立糞腸球菌感染模型，SEM觀察MBECTM P&G Assay樁釘表面糞腸球菌感染情況；

4、以次氯酸鈉溶液為陽(yáng)性對(duì)照，采用連續(xù)稀釋法檢測(cè)納米銀溶液對(duì)糞腸球菌的最小抑菌濃度(MIC)和最小生物膜清除濃度(MBEC)。⑵制備牙本質(zhì)片42個(gè)，隨機(jī)分成3組，每組14個(gè)樣本，分別置0.1％納米銀溶液、1.313％次氯酸鈉溶液和0.9％生理鹽水內(nèi)浸泡30min后，于200μL糞腸球菌懸液中培養(yǎng)1h，每組中3個(gè)樣本用于SEM觀察牙本質(zhì)表面形態(tài)和糞腸球菌粘附情況，11個(gè)樣本用于熒光染色和熒光顯微鏡定量分析牙本質(zhì)表面粘附的糞腸球菌數(shù)量并拍照記錄

5、，Image pro plus6.0軟件分析圖像，計(jì)算牙本質(zhì)表面粘附的糞腸球菌總菌數(shù)、活菌數(shù)和活菌百分比。⑶制備牙本質(zhì)片309個(gè)，樣本隨機(jī)分成3組，每組103個(gè)樣本，置于糞腸球菌懸液內(nèi)培養(yǎng)24h在牙本質(zhì)表面形成生物膜，每組中3個(gè)樣本用于SEM觀察牙本質(zhì)表面糞腸球菌生物膜表面形態(tài)，3組各余下的100個(gè)樣本分別用0.1％納米銀溶液、1.313％次氯酸鈉溶液和0.9％生理鹽水處理，3組分別于處理0h(即處理前)、1h、6h、12h、24h時(shí)取

6、出20個(gè)樣本，10個(gè)樣本用于活菌菌落計(jì)數(shù)檢測(cè)牙本質(zhì)片表面糞腸球菌生物膜活菌數(shù)，10個(gè)樣本用于熒光染色和激光共聚焦顯微鏡定量分析糞腸球菌生物膜活菌/死菌空間分布并拍照記錄，F(xiàn)luoview軟件分析生物膜掃描圖像，計(jì)算生物膜各層面活菌百分比。
　　 結(jié)果：①納米銀溶液對(duì)糞腸球菌的MIC和MBEC分別為0.006％和0.1％，次氯酸鈉溶液的MIC和MBEC分別為0.656％和1.313％。②0.1％納米銀溶液組和0.9％生理鹽水組牙本

7、質(zhì)表面形態(tài)清晰無(wú)破壞，1.313％次氯酸鈉溶液組牙本質(zhì)溶融坍塌，膠原溶解破壞。牙本質(zhì)經(jīng)0.1％納米銀溶液處理后，其表面粘附的糞腸球菌總菌數(shù)、活菌數(shù)和活菌百分比均低于1.313％次氯酸鈉溶液組和0.9％生理鹽水組(P＜0.01)。③牙本質(zhì)片表面糞腸球菌生物膜經(jīng)0.1％納米銀溶液處理1h、6h、12h生物膜活菌數(shù)逐漸減少，活菌數(shù)多于1.313％次氯酸鈉溶液組，少于0.9％生理鹽水組(P＜0.01)，0.1％納米銀溶液處理24h可完全殺滅糞腸

8、球菌。隨著0.1％納米銀溶液處理時(shí)間的延長(zhǎng)，糞腸球菌生物膜外層、中間層和內(nèi)層活菌百分比逐漸降低。0.1％納米銀溶液處理1h生物膜結(jié)構(gòu)未完全解體，但生物膜中間層和內(nèi)層活菌百分比分別降至(27.4+5.6)％和(20.8+4.5)％，0.1％納米銀溶液處理6h生物膜中間層和內(nèi)層活菌百分比降至(2.0±0.9)％和(1.8±0.9)％。0.1％納米銀溶液處理12h和24h，生物膜各層活菌百分比與1.313％次氯酸鈉溶液組無(wú)顯著性差異(P＞0.

9、05)，均少于0.9％生理鹽水組(P＜0.01)。
　　 結(jié)論：⑴納米銀溶液對(duì)糞腸球菌有較強(qiáng)的抗菌作用，0.006％的納米銀溶液可抑制糞腸球菌生長(zhǎng)，0.1％納米銀溶液可殺滅生物膜狀態(tài)糞腸球菌。⑵0.1％納米銀溶液可有效減少糞腸球菌對(duì)牙本質(zhì)的粘附且對(duì)牙本質(zhì)表面形態(tài)無(wú)明顯破壞，推測(cè)應(yīng)用納米銀溶液沖洗根管可減少糞腸球菌對(duì)根管牙本質(zhì)的粘附，抑制根管內(nèi)糞腸球菌生物膜的形成。⑶0.1％納米銀溶液可在生物膜未完全解體的情況下殺滅牙本質(zhì)表面糞腸