藻紅蛋白亞基脂質體的制備及對肝癌細胞光動力學作用實驗研究.pdf

1、藻紅蛋白(Phycoerythrin,PE)是廣泛存在于藍藻、紅藻、隱藻和少數(shù)一些甲藻中的一種捕光色素蛋白[1,2]。其亞基具有一定的熒光,可作為滲入細胞的標記,而且是一種有效的抗腫瘤光敏劑,且毒副作用小。脂質體作為藥物的載體能保護被包裹藥物,有效延長藥物作用時間,從而提高藥物的治療指數(shù)、減少藥物的治療劑量和降低藥物的毒性,增強藥物靶向作用,從而選擇性殺傷癌細胞[3]。因此探討將藻紅蛋白亞基包裹進脂質體,增強藥物對病變組織的靶向性,提高

2、療效,延緩藥物的釋放是非常有意義的。
　　前期研究發(fā)現(xiàn),脂質體的制備方法有很多,藻紅蛋白是水溶性大分子蛋白,不穩(wěn)定,其脂質體的制備方法不同于化學小分子,為了保證制備過程中保持藻紅蛋白的生物活性,根據(jù)藻紅蛋白自身的生化特性以及后期實驗的需要,嘗試了幾種脂質體制備方法,并對制備好的脂質體進行了細胞光動力學實驗,主要結果如下:
　　1.經(jīng)過幾種脂質體制備方法的嘗試,薄膜水合-超聲分散法為制備該脂質體的最佳方法。旋轉蒸發(fā)過程中溫度嚴

3、格控制在40℃以下,避免劇烈實驗條件,制備的藻紅蛋白亞基脂質體通過細胞轉染和mTT實驗證明了包裹進脂質體中的藻紅蛋白亞基仍然保持了很好的生物活性。
　　2.根據(jù)正交實驗設計表,選取對制備脂質體影響較大的幾個影響因素,進行正交實驗,得到了制備藻紅蛋白亞基脂質體的最佳工藝條件。
　　3.由熒光顯微鏡形態(tài)學觀察可見藻紅蛋白亞基確實包裹進入脂質體中,且仍保有活性;由透射電鏡觀察可見,藻紅蛋白亞基脂質體粒徑分布較均勻,外形圓整。激光粒

4、度檢測儀檢測結果顯示,藻紅蛋白亞基脂質體粒徑分布呈單峰正態(tài),粒徑主要范圍在100～180 nm,均值為136nm?？梢娭苽涞脑寮t蛋白亞基脂質體粒徑分布較均勻,分散性較好。
　　4.細胞學實驗證明,在相同的濃度與時間的情況下,藻紅蛋白亞基脂質體比藻紅蛋白亞基能較快地轉入細胞,其對腫瘤細胞的殺傷效果也略高于藻紅蛋白亞基,藻紅蛋白亞基脂質體對正常肝細胞HL7702及肝癌細胞HepG-2的轉染率有差異,且對肝癌細胞HepG-2的光動力殺傷

5、效果要明顯好于正常肝細胞HL7702.細胞凋亡實驗證明在藻紅蛋白亞基脂質體PDT作用后的細胞核染色質呈黃綠色濃聚在核膜內(nèi)側或分離成凋亡小體,細胞膜呈泡狀膨脹,失去細胞間的連接,呈現(xiàn)出典型的凋亡細胞形態(tài)[4]。
　　結論:通過薄膜水合—超聲分散法制備的藻紅蛋白亞基脂質體可以很好地保持藻紅蛋白亞基的熒光特性及PDT作用效果,且對正常肝細胞及肝癌細胞PDT作用效果有差異。但藻紅蛋白亞基脂質體對藥物的緩釋性、長效性、對不穩(wěn)定藥物的保護作用