流式細(xì)胞術(shù)在白血病和淋巴瘤中的應(yīng)用

1、流式細(xì)胞術(shù)在白血病、淋巴瘤免疫分型中的應(yīng)用,免疫分型的作用,區(qū)分淋系、髓系白血病區(qū)分淋系白血病中的T、B-ALL鑒定混合細(xì)胞性白血病的類型：T-M、B-M、T-B、T-B-M于治療過程中監(jiān)測MRD，評價療效提示某些遺傳學(xué)異常：CD56+APL---t（11；17）？CD19+AML---t（8；21）（q22；q21）？提示預(yù)后：CD7、CD11b、CD56等陽性的AML患者預(yù)后不良CD15陽性的AML患者CR率高

2、,免疫分型的原理,正常造血細(xì)胞 白血病細(xì)胞 抗原表達(dá)遵循系列保守性 出現(xiàn)抗原跨系表達(dá)髓系:CD33+,T系:CD7+ 髓系: CD33+ CD7+ 抗原表達(dá)有一定的時序性 出現(xiàn)抗原時序混亂表達(dá)原始細(xì)胞:CD34+CD11B-

3、 原始細(xì)胞:CD34+CD11B+ 各階段細(xì)胞按一定的比例分布 出現(xiàn)分化阻滯原幼細(xì)胞20%,免疫分型需要掌握什么理論知識？,正常造血細(xì)胞的抗原表達(dá)規(guī)律不同系列的細(xì)胞表達(dá)的抗原？同一系列不同階段的細(xì)胞表達(dá)的抗原？每種抗原的表達(dá)強(qiáng)度？,正常B系細(xì)胞分化圖,,源于王建中等編著的《臨床流式細(xì)胞分析》,正常T系細(xì)胞分化圖,源于王建中等編著的《臨床流式細(xì)胞分析》,正常

4、粒細(xì)胞分化圖,源于王建中等編著的《臨床流式細(xì)胞分析》,正常單核細(xì)胞分化圖,源于王建中等編著的《臨床流式細(xì)胞分析》,免疫分型中的重要抗原CD45,,正常成人骨髓標(biāo)本,,成熟粒細(xì)胞：約占40-60%，表達(dá)CD11b、CD13、CD33、CD15、CD16、CD10、CD64, 不表達(dá)CD34、HLA-DR、CD14、CD117,,有核紅細(xì)胞：<50%,表達(dá)GPA,,,,成熟單核細(xì)胞：約占2-8%，表達(dá)CD11b、CD64、CD14、

5、HLA-DR，不表達(dá)CD34、CD117,成熟淋巴細(xì)胞：約占20-40%T細(xì)胞：表達(dá)CD3、CD4、CD8、CD2、CD5、CD7,不表達(dá)CD10、CD34、TDT等 B細(xì)胞：表達(dá)CD19、CD20、CD22，不表達(dá)CD10、CD34、TDT等NK細(xì)胞：CD3-(CD16+CD56)+,正常幼稚B細(xì)胞：<5.0%,表達(dá)CD10、CD19、CD22、弱表達(dá)CD20，少量CD10stCD34+TDT+,,幼稚髓系細(xì)胞：〈5.0

6、％,免疫分型常用的抗體,AMLCD34、CD117、CD33、CD13、HLA-DR、CD11b、CD15、CD64、CD14、CD65s、MPO懷疑M6加做CD71、GPA懷疑M7加做CD61、CD41B-ALLCD34、CD10、CD19、CD20、CD22、c/mIg、TDT、cCD22/CD79aT-ALLCD34、CD10、CD3、CD4、CD8、CD2、CD5、CD7、 HLA-DR 、CD1a、 TDT、cC

7、D3NK細(xì)胞CD16、CD56、CD57漿細(xì)胞CD38、CD138、cκ、cλ、CD19、CD56,免疫分型的步驟一,第一步：初篩，初步篩選白血病類型CD7/CD19/CD33/CD10/CD117/HLA-DR/CD34/CD45CD7+CD19-CD33+/-HLA-DR-CD117+/-疑為T-ALLCD7+CD19-CD33+HLA-DR+CD117+疑為AML伴CD7+CD19+CD7-CD33-CD10+/-

8、CD117-疑為B-ALLCD19+CD7-CD33+CD10+CD117-疑為B-ALL伴CD33+CD19+CD7-CD33+CD10-CD117+疑為AML伴CD19+CD33+CD7-CD19-CD10-CD117+/-HLA-DR+疑為AMLCD33+CD7-CD19-CD10-CD117+/-HLA-DR-疑為APL,免疫分型的步驟二,第二步：確診，進(jìn)一步確定白血病類型，并且將某一系別的白血病根據(jù)分化程度的不同再分為

9、不同亞型根據(jù)初篩結(jié)果加做其他系別特異性標(biāo)記T-ALL:CD3、CD4、CD8、CD2、CD5、CD1a、 TDT、cCD3B-ALL: CD20、CD22、c/mIg、TDT、cCD22/CD79aAML:CD13、CD11b、CD15、CD64、CD14、CD65s、MPO,懷疑M6加做CD71、GPA,懷疑M7加做CD61、CD41,B-ALL免疫亞型,T-ALL免疫亞型,示例：T-ALL初篩CD7+CD19-CD33+/

10、-HLA-DR-CD117+/-,示例：AML伴CD7+初篩CD7+CD19-CD33+HLA-DR+CD117+,示例：B-ALL初篩CD19+CD7-CD33-CD10+/-CD117-,示例：BALL+CD33初篩CD19+CD7-CD33+CD10+CD117-,示例：AML+CD19初篩CD19+CD7-CD33+CD10-CD117+,示例：AML初篩CD33+CD7-CD19-CD10-CD117+/-HLA-D

11、R+,示例：AML-M3初篩CD33+CD7-CD19-CD10-CD117+/-HLA-DR-,示例：AML-M3V初篩CD33+CD7-CD19-CD10-CD117+/-HLA-DR-,混合細(xì)胞性白血病的免疫分型,雙表型：一種白血病細(xì)胞同時表達(dá)兩個或兩個以上系列標(biāo)志。雙克隆型：同時存在兩種或兩種以上異常細(xì)胞，分別表達(dá)各自的系列特異性標(biāo)志。類型：T-M、B-M、T-B、T-B-M,白血病中各種抗原的積分情況,混合細(xì)胞性白血病

12、判斷標(biāo)準(zhǔn)：每個系列積分>或=2.5分,示例：B-M型AL,示例：T-M型AL,示例：T-B-M型AL,免疫表型的預(yù)后價值,免疫分型在慢淋、淋巴瘤中的應(yīng)用簡介,腫瘤性B細(xì)胞鑒別關(guān)鍵：κ、λ輕鏈出現(xiàn)單克隆表達(dá)或雙陰性或表達(dá)強(qiáng)度明顯異常。腫瘤性T細(xì)胞鑒別關(guān)鍵：CD3、CD4、CD8、CD2、CD5、CD7中出現(xiàn)抗原表達(dá)缺失或抗原表達(dá)強(qiáng)度的改變；CD45RA、CD45RO的表達(dá)情況出現(xiàn)異常；表達(dá)TDT、CD10等幼稚抗原；TCRVβ系列

13、抗原出現(xiàn)單克隆表達(dá)。漿細(xì)胞腫瘤鑒別關(guān)鍵：CD138+細(xì)胞表達(dá)CD56，不表達(dá)CD19，出現(xiàn)cyκ、cyλ輕鏈的單克隆表達(dá)。NK細(xì)胞腫瘤鑒別關(guān)鍵：出現(xiàn)CD16、CD56、CD7、CD2等抗原的缺失，CD45表達(dá)強(qiáng)度的改變每種類型都必須關(guān)注異常細(xì)胞CD45表達(dá)強(qiáng)度、SSC、FSC的變化。,示例：正常淋巴細(xì)胞,正常T細(xì)胞,正常B細(xì)胞,正常NK細(xì)胞,示例：B-CLL/SLL,示例：MCL,示例：HCL,示例：Burkkit淋巴瘤,示例：F