流動(dòng)注射型酶?jìng)鞲衅鳒y(cè)定蔬菜中西維因農(nóng)殘的方法研究.pdf

1、氨基甲酸酯類農(nóng)藥是目前蔬菜、糧食等作物中使用最廣泛的農(nóng)藥種類之一。隨著病蟲害抗藥性的逐年增加,農(nóng)藥用量越來越大,施藥次數(shù)更加頻繁,使農(nóng)藥殘留問題更加突出。因此,建立和完善快速、便捷的農(nóng)藥殘留多樣品分析技術(shù),增加農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法的多樣性,意義重大。在前人研究的基礎(chǔ)上,對(duì)西維因農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)方法進(jìn)行了研究。氨基甲酸酯類農(nóng)藥能抑制動(dòng)物體內(nèi)膽堿酯酶(Cholinesterase,ChE)的活性,在一定條件下,ChE的活性變化與該類農(nóng)藥的濃度存

2、在良好的相關(guān)性,從而通過測(cè)定農(nóng)產(chǎn)品的農(nóng)藥殘留提取液對(duì)ChE酶活力的影響即可判定農(nóng)藥殘留的情況。本文從酶的固定及酶學(xué)性質(zhì)研究、流動(dòng)注射分析系統(tǒng)的組裝及測(cè)定過程的條件優(yōu)化、農(nóng)殘樣品的檢測(cè)等方面進(jìn)行了研究,結(jié)果如下:1.通過固定化條件的比較研究,以6.0％的海藻酸鈉為載體,1.2%的的普魯卡因胺為吸附劑,將海藻酸鈉與普魯卡因胺按照7:1的比例加入到檸檬酸緩沖液(pH=7.5)中,同時(shí)滴加0.5%的牛血清白蛋白,在38℃水浴中海藻酸鈉融化后,與

3、濃度為20%的酶混合,滴加到20g/L的氯化鈣溶液中,輕微攪拌,室溫下放置8h;過濾,用檸檬酸緩沖溶液(pH=7.5)洗滌2～5次,加入到1.2%的戊二醛溶液中,在35℃條件下交聯(lián)60min,再用檸檬酸緩沖溶液(pH=7.5)洗滌2～5次,研究結(jié)果表明,固定化酶活性良好,與游離酶相比,固定化酶的熱穩(wěn)定性和對(duì)酸堿度的穩(wěn)定性顯著提高。2.通過研究流動(dòng)注射型酶?jìng)鞲衅鳈z測(cè)農(nóng)藥殘留,實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),在控制樣品流速(抑制時(shí)間)為0.6ml/ min、底物

4、濃度控制在80mmol·L-1、酶柱采用Φ6×40mm時(shí),傳感器運(yùn)行良好,具有較好的重現(xiàn)性(RSD=1.016,n=7),西維因濃度在0.2～146.8μg/ml范圍內(nèi)有良好的抑制效果,抑制率與農(nóng)藥殘留的濃度成正比。對(duì)樣品做回收率實(shí)驗(yàn),測(cè)得的數(shù)據(jù)與HPLC法檢測(cè)的結(jié)果基本一致。3.通過該法制備的傳感器,可重復(fù)利用性好,用檸檬酸鹽緩沖液沖洗固定化酶柱30min,或者用高濃度的底物沖洗固定化酶柱15min,進(jìn)行酶活力測(cè)試,數(shù)據(jù)顯示,酶基本復(fù)