無核雪柑授粉受精及種胚敗育的研究.pdf

1、基于無核雪柑胚胎及其生物學特性的研究很少，且其無核、少核的性狀穩(wěn)定，具有一定的研究價值等特點，選取了無核雪柑作為研究材料。本項目從授粉受精生物學、種胚發(fā)育過程的石蠟切片、鏡檢觀察及蛋白質的雙向電泳三個方面對無核雪柑與普通雪柑進行比較研究，旨在通過觀察無核雪柑胚胎敗育前后的形態(tài)變化，檢測此過程蛋白質的差異，探討整個發(fā)育過程存在的特異蛋白，以明了無核雪柑的無核機理。 1無核雪柑與普通雪柑的授粉受精生物學研究了無核雪柑與普通雪柑兩個品

2、種花的形態(tài)特征、花粉離體培養(yǎng)的發(fā)芽率、授粉后花粉在柱頭的萌發(fā)情況等。結果表明其花粉均具有可育性，但離體培養(yǎng)的花粉及授粉后的發(fā)芽率存在較大差異。離體培養(yǎng)普通雪柑花粉發(fā)芽率為26.91％，無核雪柑花粉發(fā)芽率僅為9.33％；普通雪柑×普通雪柑組合授粉2d花粉在柱頭上的發(fā)芽最好，發(fā)芽率高達80％，花粉管長超過花粉粒徑的3～5倍；無核雪柑×無核雪柑組合花粉的發(fā)芽率僅為5％，且花粉管很短，無核雪柑×普通雪柑授粉組合居中。無核雪柑花粉雖然可育，但柱頭

3、的乳突結構和花柱的花柱道不發(fā)達，自交不親和，坐果率低。不同授粉組合坐果率差異較大，普通雪柑×普通雪柑坐果率為1.91％，無核雪柑×無核雪柑和無核雪柑×普通雪柑2個組合坐果率分別為0.25％和0.38％。 2無核雪柑與普通雪柑種胚發(fā)育的解剖學研究對不同授粉組合的種胚進行石蠟切片觀察，選擇有代表性的進行拍照。結果表明，珠被、珠心、胚囊及珠心胚等組織不同時間存在不同程度的崩潰、瓦解及最終的消失，是導致無核雪柑無核、少核的一個重要原因。

4、普通雪柑×普通雪柑種胚發(fā)育比較正常，合子胚出現(xiàn)時期早于無核雪柑×普通雪柑組合，果實成熟時可育種子約占50％，胚數(shù)6.4個/果；無核雪柑×普通雪柑組合只能產生部分可育種子，約占7.5％，其胚比普通雪柑組合的小，但數(shù)量稍多，約7.3個/果；無核雪柑×無核雪柑胚胎完全敗育，不能產生正常種子。無核雪柑×普通雪柑合子胚出現(xiàn)時期較遲，故其成熟果實中正常種子也較小。 3無核雪柑與普通雪柑種胚發(fā)育過程蛋白質的差異采用雙向電泳分析不同授粉組合種胚

5、不同發(fā)育時期蛋白質的特異性，并用考馬斯亮藍G-250法測定其蛋白質含量。結果表明：無核雪柑種胚早期的蛋白質含量相對較高，授粉54d以后與普通雪柑的種胚蛋白質相當，少數(shù)蛋白質在數(shù)量、分子量、等電點及時間上存在差異。無核雪柑不同發(fā)育階段蛋白質組分相對穩(wěn)定，但有其發(fā)育階段特異性，出現(xiàn)了6個特異蛋白質(P1～P6)，分別是P1(97.0kD，pI6.2)、P2(13.5kD，pI5.2)、P3(19.8kD，pI6.5)，P4(10.3kD，p

6、I4.8)，P5(12.5kD，pI5.9)及P6(38.6kD，pI5.7)；從無核雪柑與普通雪柑的對比中，發(fā)現(xiàn)了3個僅存在于無核雪柑胚胎中的特異蛋白質P11～P13，P11(67.0kD，pI5.1)、P12(65.5kD，pI5.4)及P13(97.0kD，pI5.8)；另外，P14(64.3kD，pI5.9)在無核雪柑胚胎中表達量明顯大于普通雪柑，這4個蛋白質在無核雪柑胚胎發(fā)育時期表達很穩(wěn)定，認為這4個蛋白質是與無核雪柑胚胎敗育