大鼠急性內(nèi)囊出血對(duì)白細(xì)胞流變學(xué)行為的影響.pdf

1、目的：白細(xì)胞在血液中的流變行為是其在體內(nèi)發(fā)揮功能的重要病理生理機(jī)制。本研究擬從細(xì)胞流變學(xué)的角度出發(fā)，利用動(dòng)物在體實(shí)驗(yàn)的方法，闡明腦出血急性期白細(xì)胞的變形性、趨化性和粘附性的變化規(guī)律，對(duì)該問題的深入闡明不僅可對(duì)腦出血時(shí)白細(xì)胞的功能有嶄新的認(rèn)識(shí)，而且對(duì)于采取積極有效的干預(yù)措施，改善腦出血患者的預(yù)后有十分重要的臨床意義。 方法：1.大鼠自體血內(nèi)囊出血?jiǎng)游锬Ｐ偷慕ⅲ簯?yīng)用48只健康成年雄性Wistar大鼠(清潔級(jí))，用10％水合氯醛腹腔

2、注射麻醉后，俯臥位固定在立體定向儀上。顱頂備皮，醫(yī)用酒精消毒手術(shù)區(qū)皮膚，正中矢狀切口約1.5cm，剝離皮下組織及骨膜，暴露“十字縫”和“人字縫”。根據(jù)包新民等著“大鼠腦立體定位圖譜”確定右側(cè)內(nèi)囊后肢位置：前囟后3.3mm，矢狀縫右側(cè)3.2mm，垂直進(jìn)針7.1mm。確定位置后用牙科鉆(鉆頭直徑1mm)鉆破顱骨，采取二次注血、二次停針法，緩慢注入在大鼠斷尾處采取的自體血液0.1ml，建立內(nèi)囊出血?jiǎng)游锬Ｐ?，假手術(shù)只做刺入動(dòng)作，不注射血液，作為

3、手術(shù)對(duì)照組。大鼠清醒后采用Berderson評(píng)分法進(jìn)行行為學(xué)評(píng)價(jià)，評(píng)分在手術(shù)后3h、6h、12h、24h進(jìn)行。2.大鼠內(nèi)囊出血后腦組織形態(tài)學(xué)的觀察：不同實(shí)驗(yàn)組的大鼠斷頭處死，小心剝離顱骨，取出完整腦組織，固定在4％多聚甲醛24h。將固定好的腦組織取出放在冰盤上以針孔為中心連續(xù)冠狀切片(片厚5um)。切片常規(guī)脫蠟，HE染色，在光鏡下觀察病灶處血腫及組織學(xué)改變。3.微循環(huán)觀察：運(yùn)用微循環(huán)顯微鏡、計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)對(duì)大鼠腸系膜后靜脈內(nèi)白細(xì)胞的

4、流變行為(趨邊、粘附及變形)進(jìn)行直觀研究。通過圖像分析系統(tǒng)上回放錄像帶，選擇無分支、長(zhǎng)度100μm、直徑10～30μm的微血管進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。4.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：應(yīng)用SPSS15.0醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)軟件包，各組數(shù)據(jù)結(jié)果用x±s表示，組間比較均采取方差分析中的SNK法，P<0.05為差異有顯著性。 結(jié)果：1.實(shí)驗(yàn)組不同時(shí)期腦組織病理形態(tài)在光鏡下均可見腦實(shí)質(zhì)內(nèi)出血灶，圓形或橢圓形，大小不一，低倍視野內(nèi)遍布紅細(xì)胞，出血灶邊緣腦組織疏松水腫(見圖2-

5、5)。ICH后3h，血腫周圍即出現(xiàn)部分神經(jīng)細(xì)胞、膠質(zhì)細(xì)胞腫脹，細(xì)胞間隙出現(xiàn)大小不等的空泡，少數(shù)神經(jīng)細(xì)胞壞死、消失，白細(xì)胞浸潤(rùn)。上述病理變化隨著血腫形成的時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸嚴(yán)重。2.從腦出血后3h到12h，白細(xì)胞沿壁滾動(dòng)速度明顯減慢。白細(xì)胞滾動(dòng)速度從(14.94±4.23)um/s降低到(3.03±0.47)um/s，各組之間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。3.從腦出血后3h到12h，白細(xì)胞粘附數(shù)、滾動(dòng)數(shù)顯著增多。白細(xì)胞粘附數(shù)從(2.96

6、±0.33)個(gè)/100um增加到(15.29±1.96)個(gè)/100um，滾動(dòng)數(shù)從(8.83±0.96)個(gè)/min增加到(36.71±1.33)個(gè)/min，各組之間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。4.從腦出血后3h到12h，總體白細(xì)胞-內(nèi)皮細(xì)胞接觸時(shí)間(TLECT)顯著延長(zhǎng)。TLECT從(2.89±0.24)s增加到(17.24±2.99)s，各組之間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論：1.通過改良后的腦立體定向術(shù)可以

7、準(zhǔn)確復(fù)制大鼠自體血內(nèi)囊出血?jiǎng)游锬Ｐ汀?.腦出血急性期血腫壓迫產(chǎn)生的占位效應(yīng)、血腫成分及其降解產(chǎn)物的化學(xué)毒性作用、血腫腔內(nèi)炎癥反應(yīng)和炎癥因子等因素都可能造成微循環(huán)障礙，引起血腫周圍組織的繼發(fā)性損傷。3.腦出血急性期，機(jī)體常處于高度應(yīng)激狀態(tài)，由于植物神經(jīng)中樞受損，神經(jīng)-體液調(diào)節(jié)功能紊亂而發(fā)生應(yīng)激性潰瘍等其它器官的應(yīng)激性病變。腦出血的刺激對(duì)白細(xì)胞的生理功能有顯著影響，體現(xiàn)在變形性降低、趨化性增強(qiáng)、膜流動(dòng)性改變以及白細(xì)胞數(shù)目的增加。微循環(huán)障礙是