大鼠急性內(nèi)囊出血對白細胞流變學(xué)行為的影響.pdf

1、目的：白細胞在血液中的流變行為是其在體內(nèi)發(fā)揮功能的重要病理生理機制。本研究擬從細胞流變學(xué)的角度出發(fā)，利用動物在體實驗的方法，闡明腦出血急性期白細胞的變形性、趨化性和粘附性的變化規(guī)律，對該問題的深入闡明不僅可對腦出血時白細胞的功能有嶄新的認識，而且對于采取積極有效的干預(yù)措施，改善腦出血患者的預(yù)后有十分重要的臨床意義。 方法：1.大鼠自體血內(nèi)囊出血動物模型的建立：應(yīng)用48只健康成年雄性Wistar大鼠(清潔級)，用10％水合氯醛腹腔

2、注射麻醉后，俯臥位固定在立體定向儀上。顱頂備皮，醫(yī)用酒精消毒手術(shù)區(qū)皮膚，正中矢狀切口約1.5cm，剝離皮下組織及骨膜，暴露“十字縫”和“人字縫”。根據(jù)包新民等著“大鼠腦立體定位圖譜”確定右側(cè)內(nèi)囊后肢位置：前囟后3.3mm，矢狀縫右側(cè)3.2mm，垂直進針7.1mm。確定位置后用牙科鉆(鉆頭直徑1mm)鉆破顱骨，采取二次注血、二次停針法，緩慢注入在大鼠斷尾處采取的自體血液0.1ml，建立內(nèi)囊出血動物模型，假手術(shù)只做刺入動作，不注射血液，作為

3、手術(shù)對照組。大鼠清醒后采用Berderson評分法進行行為學(xué)評價，評分在手術(shù)后3h、6h、12h、24h進行。2.大鼠內(nèi)囊出血后腦組織形態(tài)學(xué)的觀察：不同實驗組的大鼠斷頭處死，小心剝離顱骨，取出完整腦組織，固定在4％多聚甲醛24h。將固定好的腦組織取出放在冰盤上以針孔為中心連續(xù)冠狀切片(片厚5um)。切片常規(guī)脫蠟，HE染色，在光鏡下觀察病灶處血腫及組織學(xué)改變。3.微循環(huán)觀察：運用微循環(huán)顯微鏡、計算機圖像分析系統(tǒng)對大鼠腸系膜后靜脈內(nèi)白細胞的

4、流變行為(趨邊、粘附及變形)進行直觀研究。通過圖像分析系統(tǒng)上回放錄像帶，選擇無分支、長度100μm、直徑10～30μm的微血管進行數(shù)據(jù)分析。4.統(tǒng)計學(xué)方法：應(yīng)用SPSS15.0醫(yī)學(xué)統(tǒng)計軟件包，各組數(shù)據(jù)結(jié)果用x±s表示，組間比較均采取方差分析中的SNK法，P<0.05為差異有顯著性。 結(jié)果：1.實驗組不同時期腦組織病理形態(tài)在光鏡下均可見腦實質(zhì)內(nèi)出血灶，圓形或橢圓形，大小不一，低倍視野內(nèi)遍布紅細胞，出血灶邊緣腦組織疏松水腫(見圖2-

5、5)。ICH后3h，血腫周圍即出現(xiàn)部分神經(jīng)細胞、膠質(zhì)細胞腫脹，細胞間隙出現(xiàn)大小不等的空泡，少數(shù)神經(jīng)細胞壞死、消失，白細胞浸潤。上述病理變化隨著血腫形成的時間延長而逐漸嚴(yán)重。2.從腦出血后3h到12h，白細胞沿壁滾動速度明顯減慢。白細胞滾動速度從(14.94±4.23)um/s降低到(3.03±0.47)um/s，各組之間比較均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。3.從腦出血后3h到12h，白細胞粘附數(shù)、滾動數(shù)顯著增多。白細胞粘附數(shù)從(2.96

6、±0.33)個/100um增加到(15.29±1.96)個/100um，滾動數(shù)從(8.83±0.96)個/min增加到(36.71±1.33)個/min，各組之間比較均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。4.從腦出血后3h到12h，總體白細胞-內(nèi)皮細胞接觸時間(TLECT)顯著延長。TLECT從(2.89±0.24)s增加到(17.24±2.99)s，各組之間比較均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論：1.通過改良后的腦立體定向術(shù)可以

7、準(zhǔn)確復(fù)制大鼠自體血內(nèi)囊出血動物模型。2.腦出血急性期血腫壓迫產(chǎn)生的占位效應(yīng)、血腫成分及其降解產(chǎn)物的化學(xué)毒性作用、血腫腔內(nèi)炎癥反應(yīng)和炎癥因子等因素都可能造成微循環(huán)障礙，引起血腫周圍組織的繼發(fā)性損傷。3.腦出血急性期，機體常處于高度應(yīng)激狀態(tài)，由于植物神經(jīng)中樞受損，神經(jīng)-體液調(diào)節(jié)功能紊亂而發(fā)生應(yīng)激性潰瘍等其它器官的應(yīng)激性病變。腦出血的刺激對白細胞的生理功能有顯著影響，體現(xiàn)在變形性降低、趨化性增強、膜流動性改變以及白細胞數(shù)目的增加。微循環(huán)障礙是