附子質(zhì)量評價及烏頭堿類成分藥動學(xué)研究.pdf

1、本論文分附子質(zhì)量評價研究和附子中烏頭堿類成分藥動學(xué)研究兩部分。 一、第一部分應(yīng)用HPLC以及R285HPLC/MS技術(shù)對附子生藥指紋圖譜的建立與附子炮制品的含量測定進(jìn)行了研究。附子(Radix Aconiti Lateralis Praeparata)為毛茛科烏頭屬植物烏頭 Aconitum carmichaeli Debx．的子根的加工品，從附子中分離鑒定的化學(xué)成分主要有生物堿和脂類兩大類化合物。國內(nèi)外研究表明，附子生物堿類化

2、合物具有多方面的藥理活性和臨床功效。歷版《中華人民共和國藥典》對于附子的質(zhì)量控制都是對其酯型生物堿的限量檢查。為了更科學(xué)、客觀地反映附子的內(nèi)在質(zhì)量，建立基于中藥成分系統(tǒng)研究基礎(chǔ)上的指紋圖譜是一種有效的手段。將LC/MS技術(shù)應(yīng)用于中藥指紋圖譜的研究中，是對常規(guī)色譜強有力的支持，通過對多種流出成分的質(zhì)譜檢測，可增加指紋圖譜的“可知性”。HPLC技術(shù)對于中藥指紋圖譜研究中藥材提取方法的研究，實驗條件的選擇與優(yōu)化以及MS技術(shù)對于中藥成分的歸屬等

3、均起著重要的作用。本論文對附子生藥指紋圖譜建立中的分析方法進(jìn)行了研究，采用Hepersil BDS C<,18>色譜柱進(jìn)行附子生物堿成分液相分離的色譜條件；運用HPLC/MS技術(shù)對附子生藥中的主要色譜峰進(jìn)行了初步歸屬；利用中藥色譜指紋圖譜相似度評價軟件評價了各批樣品指紋圖譜間的相似程度。研究結(jié)果表明，以IIPLC法建立的附子生藥指紋圖譜較全面地反映了附子的內(nèi)在質(zhì)量，可作為附子生藥質(zhì)量控制及其炮制品指紋圖譜建立的依據(jù)之一。 在指紋

4、圖譜研究的基礎(chǔ)上，本論文還對附子生藥及其炮制品中的主要生物堿成分-雙酯型生物堿烏頭堿、中烏頭堿和次烏頭堿以及單酯型生物堿苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰中烏頭原堿和苯甲酰次烏頭原堿的含量進(jìn)行了測定，為附子生藥及其炮制品質(zhì)量控制的建立提供科學(xué)支撐。 二、第二部分建立了體外血漿溫孵法測定烏頭堿、中烏頭堿和次烏頭堿水解規(guī)律的方法?？瞻淄醚獫{加入不同濃度的3種生物堿混合對照品溶液，通過對溫孵不同時間血漿樣品的預(yù)處理(沉淀蛋白、除雜)、分離和檢測等

5、過程實現(xiàn)復(fù)雜生物樣品中待測成分的分離分析。所建立的體外水解方法簡單、穩(wěn)定、可控，對上述3種成分的體內(nèi)藥動學(xué)研究具有一定的參考意義。 在體外血漿溫孵試驗和急性毒性試驗的基礎(chǔ)上，建立了附子總生物堿中主要成分(烏頭堿、中烏頭堿和次烏頭堿)在大鼠血漿樣品中UPLC/MS/MS測定法。大鼠血漿中加入一定體積磷酸，以固相萃取法提取待測成分，采用UPLC/ESI/MS/MS聯(lián)用技術(shù)，多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)掃描方式(烏頭堿監(jiān)測離子對646.3→5

6、86.0和646.3→367.9；中烏頭堿監(jiān)測離子對632.3→572.0和632.3→354.0；次烏頭堿監(jiān)測離子對616.3→556.0和616.3→337.9)同時測定大鼠血漿中附子總堿各主要成分的濃度；優(yōu)化的色譜條件為Acquity UPLC<'TM> BEH C<,18>色譜柱，乙腈-0.05％氨水溶液為流動相，梯度洗脫，3種生物堿類成分在3 min內(nèi)即可完全分離，內(nèi)源性物質(zhì)不干擾樣品的測定；血漿樣品提取回收率均高于85％；定

7、量限烏頭堿、中烏頭堿和次烏頭堿分別為0.0516 ng·mL<'-1>，0.0744 ng·mL<'-1>和0.0427 ng·mL<'-1>；日內(nèi)和日間精密度的RSD均小于6％。該測定方法具有靈敏度高、專屬性強、快速的優(yōu)點，符合生物樣品分析要求。選取3只大鼠灌胃(ig)附子總堿，灌胃給藥劑量為0.2 g附子生藥·kg<'-1>。從附子總堿大鼠灌胃的血藥濃度．時間曲線可以看出，烏頭堿、中烏頭堿和次烏頭堿的藥時曲線均為雙峰，無法用房室模型

8、擬合，推測雙峰是由于3種成分的腸肝循環(huán)造成的。烏頭堿、中烏頭堿和次烏頭堿按非線性統(tǒng)計矩法計算的AUCO-t分別為4.277±0.754，7.950±2.909和24.75±4.05 ng·mL<'-1>·h；t<,1/2>分另0為1.40±0.26，1.49±0.08和1.73±0.03 h；MRT分別為3.758±0.524，3.645±0.477和4.012±0.381 h。通過上述研究，初步得出了烏頭堿、中烏頭堿和次烏頭堿藥動學(xué)的