實(shí)驗(yàn)感染小鼠肉汁中抗旋毛蟲抗體水平的觀察.pdf

1、旋毛蟲病是一種嚴(yán)重的人獸共患寄生蟲病，主要因生食或半生食含有旋毛蟲幼蟲囊包的豬肉或其它動物肉類而感染。因此，對肉類及肉制品中進(jìn)行旋毛蟲檢疫是旋毛蟲病防治工作的重要內(nèi)容。目前用于肉類中旋毛蟲檢疫的方法有旋毛蟲鏡檢查法和人工消化法，但前者的敏感性低，而后者操作較復(fù)雜不易推廣應(yīng)用。由于IgG抗體在宿主血液和組織液內(nèi)均有分布，應(yīng)用免疫學(xué)方法從動物肉汁中進(jìn)行抗旋毛蟲抗體的檢測有望用于旋毛蟲的檢疫。然而，關(guān)于動物感染旋毛蟲后肉汁中抗體水平的動態(tài)變化

2、尚未見報(bào)道。鑒于此，本文應(yīng)用旋毛蟲小鼠動物模型，通過間接ELISA對不同劑量旋毛蟲感染小鼠后不同時間血清和肉汁的抗體水平進(jìn)行了研究；并對小鼠肌肉在不同溫度下保存不同時間后肉汁抗體水平的動態(tài)變化進(jìn)行了觀察。 材料和方法 1.對ELISA檢測旋毛蟲感染小鼠肉汁抗體的最適條件進(jìn)行了選擇，包括抗原的最適包被濃度及血清最佳稀釋度，酶標(biāo)二抗、肉汁最佳稀釋液及最佳稀釋度的選擇。 2.將300只健康昆明小鼠隨機(jī)分成3組，每組10

3、0只。每組分別感染旋毛蟲100條/只(輕度感染組)、300條/只(中度感染組)和500條/只(重度感染組)，觀察小鼠感染不同劑量旋毛蟲后不同時間(1-18周)血清及肉汁抗體水平的變化。 3.將32只健康昆明小鼠隨機(jī)分為4組，每組8只。每只分別感染50、100、300、500條旋毛蟲，感染6后周觀察小鼠膈肌蟲荷與血清及肉汁抗體水平的關(guān)系。 4.將70只健康昆明小鼠隨機(jī)分成5組，每組14只。5組分別感染不同種的旋毛蟲(旋毛蟲

4、、鄉(xiāng)土旋毛蟲、布氏旋毛蟲、偽旋毛蟲、納氏旋毛蟲)，每只感染500條幼蟲。感染后6周觀察小鼠膈肌蟲荷，并用旋毛蟲肌幼蟲排泄-分泌(excretory-secretory,ES)抗原檢測感染不同種旋毛蟲小鼠的血清和肉汁抗體平。 5.將30只感染旋毛蟲小鼠(500條幼蟲/只)，感染40天后剖殺，制備混合肉樣，每份混合肉樣重1g，分別置于塑料容器中密閉，在4℃保存1-7天及-20℃保存1-20周，觀察肉樣保存不同時間后肉汁抗體水平的變化

5、。 結(jié)果 1.選擇了ELISA檢測抗旋毛蟲抗體的最適條件。ES抗原的最適包被濃度為5μg/ml，血清最佳稀釋度為1:50，包被抗原為ES抗原，酶標(biāo)二抗為HRP--羊抗小鼠IgG，稀釋液為含3％脫脂奶粉的PBST，肉樣與稀釋液比例為1g肉樣用4ml稀釋液。 2.每只感染100、300、500條旋毛蟲的輕、中、重度感染組小鼠血清及肉抗體水平均隨均染后時間的延長而逐漸升高，重度感染組的抗體檢出時間比輕度感染組早1周。在

6、感染后第8周，3個感染組的血清及肉汁抗體水平達(dá)到高峰，隨后抗體水平雖有所下降，抗體陽性率仍均為100％并持續(xù)至實(shí)驗(yàn)結(jié)束時的感染后第18周。在3個感染組小鼠血清與肉汁抗體水平具有相關(guān)性(P＜0.05)。 3.感染不同劑量旋毛蟲(50、100條、300、500條)的小鼠，感染后6周的膈肌蟲荷與血清及肉汁抗體水平均無相關(guān)性，但與感染劑量有相關(guān)性(r=0.999，P＜0.05)。4.用不同種旋毛蟲感染小鼠后發(fā)現(xiàn)，旋毛蟲感染的小鼠肌肉蟲荷

7、最高(400.2±143.9)，鄉(xiāng)土旋毛蟲感染小鼠的蟲荷最低(225.6±81.6)，而布氏旋毛蟲、偽旋毛蟲及納氏旋毛蟲感染小鼠的肌肉蟲荷量適中。用旋毛蟲肌幼蟲ES抗原ELISA檢測分別感染不同種旋毛蟲小鼠的血清及肉汁抗旋毛蟲抗體陽性率均為100％。鄉(xiāng)土旋毛蟲、布氏旋毛蟲、偽旋毛蟲、納氏旋毛蟲感染小鼠血清及肉汁抗體水平相比較均無顯著性差異(P＞0.05)，且血清及肉汁抗體水平具有相關(guān)性(P＜0.05)。結(jié)果表明在旋毛蟲、鄉(xiāng)土旋毛蟲、布氏

8、旋毛蟲、偽旋毛蟲及納氏旋毛蟲感染時，均可用肉汁替代血清作為旋毛蟲病的檢測樣本。 5.感染旋毛蟲小鼠肌肉在4℃保存7天后與第1天相比肉汁抗體水平(OD值)無顯著性差異(P＞0.05)。感染旋毛蟲小鼠肌肉在-20℃保存8周的肉汁抗體水平與保存1周的相比無明顯下降(P＞0.05)；雖然保存10周的肉汁抗體水平與保存1周的相比已有顯著性差異(P＜0.05)，但旋毛蟲抗體仍均陽性并持續(xù)至實(shí)驗(yàn)結(jié)束時的保存20周。 結(jié)論 1.

9、感染不同劑量旋毛蟲小鼠的血清及肉汁抗體水平均隨感染后時間的延長而逐漸升高，感染后第8周達(dá)高峰，隨后抗體水平有所下降，但可持續(xù)至實(shí)驗(yàn)結(jié)束時的感染后第18周。肉汁抗體與血清抗體水平具有相關(guān)性，肉汁可替代血清作為旋毛蟲病的檢測樣本。 2.感染旋毛蟲小鼠的肌肉蟲荷與血清及肉汁抗體水平無相關(guān)性，但與感染劑量有相關(guān)性； 3.感染旋毛蟲的小鼠肌肉4℃保存1周和-20℃保存8周對肉汁抗體的檢測無明顯影響，在-20℃保存20周的所有肉樣中