Th2對旋毛蟲感染小鼠Eos發(fā)揮ADCC效應(yīng)的影響.pdf

1、旋毛蟲病是由旋毛形線蟲(Trichinella spiralis)簡稱旋毛蟲,引起的一種人獸共患寄生蟲病。宿主感染旋毛蟲后,機體可以通過一系列的非特異性和特異性免疫反應(yīng)控制感染,嗜酸性粒細胞(Eosinophil,Eos)在抗旋毛蟲感染的過程中發(fā)揮了至關(guān)重要的作用。本實驗旨在探討Th2型免疫應(yīng)答對Eos抗感染作用的影響。
　　 目的:
　　 探討Th2應(yīng)答在抗旋毛蟲免疫的過程中如何調(diào)節(jié)。Eos的功能,進一步了解嗜酸性粒細

2、胞(Eos)在抗旋毛蟲感染中的作用和地位,從而為闡明旋毛蟲病的免疫學(xué)機制提供理論依據(jù),為臨床開發(fā)新的免疫療法及疫苗提供理論依據(jù)和研究方向。
　　 方法:
　　 1.旋毛蟲感染動物模型及Th2免疫抑制動物模型的建立。用灌胃法為BALB/c小鼠接種旋毛蟲肌幼蟲200條/只。腹腔注射D-sphingosine來抑制小鼠的Th2免疫。每日觀察小鼠體重和飲食,記錄其變化。
　　 2.相關(guān)免疫學(xué)指標(biāo)測定。RT-PCR法測定小

3、鼠脾臟IL-4、IL-5 mRNA含量。
　　 3.組織病理學(xué)觀察。取小鼠腓腸肌制作石蠟切片,HE染色,光鏡下觀察肌肉組織內(nèi)旋毛蟲幼蟲囊包形態(tài)及囊包周圍炎癥反應(yīng)區(qū)面積。
　　 4.Eos體外殺傷旋毛蟲肌幼蟲實驗。取小鼠全血,制備免疫血清,并用Ficoll密度梯度離心法分離、提純感染旋毛蟲的小鼠血液中的Eos。根據(jù)實驗分組,在96孔培養(yǎng)板上加入各組小鼠的Eos、免疫血清、1640培養(yǎng)基及旋毛蟲肌幼蟲,采用體外培養(yǎng)法觀察不同

4、時期幼蟲的死亡率。
　　 5.統(tǒng)計學(xué)分析。用SPSS13.0統(tǒng)計軟件對實驗所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析。
　　 結(jié)果:
　　 1小鼠體重飲食變化。接種旋毛蟲后第9d之前,三組小鼠體重?zé)o明顯差異,這段時間中,感染對照組和免疫抑制組小鼠飲食量開始減少,精神狀況不佳,不喜活動,被毛凌亂,無光澤；第9d至第18d,體重上,正常對照組大于感染對照組和免疫抑制組,這段時間內(nèi)感染對照組的飲食和癥狀開始有所改善,而免疫抑制組并無太大變

5、化；18d后,正常對照組體重大于感染對照組大于免疫抑制組,這段時間中,感染對照組小鼠開始恢復(fù)飲食,精神狀況與對照組已基本無異,癥狀基本消失,且免疫抑制組飲食癥狀也開始改善,但仍顯精神不振,被毛凌亂。
　　 2.小鼠脾臟IL-4表達。與正常對照組相比,感染對照組小鼠IL-4的表達水平明顯升高(p<0.001)；而免疫抑制組IL-4表達水平與正常對照組沒有顯著差異。旋毛蟲感染可以誘導(dǎo)小鼠表達大量的IL-4,明顯高于正常對照組,而注射

6、D-sphingosine后,可有效的抑制IL-4在小鼠脾臟內(nèi)表達,使IL-4表達量與未感染小鼠無異。
　　 3.小鼠脾臟IL-5的表達。與正常對照組相比,感染對照組和免疫抑制組小鼠IL-5的表達水平均明顯升高(p<0.001)；且感染對照組小鼠IL-5的表達水平高于免疫抑制組。旋毛蟲感染小鼠后,IL-5表達量增加,同正常對照組相比,明顯升高。D-sphingosine對IL-5表達也有一定的抑制作用,但強度稍差,感染旋毛蟲小鼠

7、注射D-sphingosine后,IL-5表達雖然下調(diào),但其表達量仍高于正常對照組。
　　 4.組織病理學(xué)變化。感染對照組和免疫抑制組小鼠腓腸肌切片中均可觀察到大量的幼蟲囊包,且在幼蟲囊包和受累肌纖維周圍存在明顯的炎癥反應(yīng)區(qū)域,區(qū)域內(nèi)炎癥反應(yīng)較為強烈,有大量炎細胞浸潤,肌纖維變性、腫脹內(nèi)部有大量膠原沉積。在100倍鏡下測量炎癥反應(yīng)區(qū)寬度,結(jié)果顯示,與感染對照組相比,免疫抑制組小鼠肌肉中幼蟲囊包周圍炎癥區(qū)域?qū)挾让黠@增加(p<0.0

8、01),免疫抑制組肌肉內(nèi)的炎癥反應(yīng)強度高于感染對照組。
　　 5.Eos體外殺傷旋毛蟲肌幼蟲。培養(yǎng)12h后,各組的幼蟲平均死亡率均較低且各組間無顯著差別；24h后,平均死亡率均有所上升,以Eos加正常血清組升高最為明顯；48h后,平均死亡率明顯升高,最為顯著的是Eos加正常血清組。對48小時的各組幼蟲平均死亡率進行卡方檢驗結(jié)果顯示同正?？瞻捉M相比,Eos加免疫血清組死亡率明顯提高(p<0O.01),且在相同情況下,感染對照組幼蟲

9、死亡率明顯高于免疫抑制組(p<0.01)。
　　 結(jié)論:
　　 小鼠感染旋毛蟲后,IL-4、IL-5表達水平明顯上調(diào),而D-sphingosine可以抑制Th2免疫,從而使這兩種細胞因子的表達明顯下調(diào)。免疫抑制的小鼠感染旋毛蟲之后的癥狀更為嚴(yán)重,其外周血中的Eos體外殺傷旋毛蟲肌幼蟲的能力也有所下降,其因為是IL-4和IL-5含量的降低造成了Eos的成熟和激活發(fā)生障礙,且依賴Th2免疫的特異性IgE含量下降有關(guān)。因此Th