蘋果SSR反應體系的建立及品種資源遺傳多樣性分析.pdf

1、蘋果是世界上栽培最廣泛的果樹之一，由于蘋果具有童期長、生長周期長、植株大和自交不親和等特點，用傳統(tǒng)的方法進行蘋果品種鑒定費時費力且費用較高。近年來，隨著分子生物學的興起，特別是DNA分子標記技術在蘋果上的發(fā)展和應用，使蘋果品種快速鑒定成為可能，其中SSR分子標記技術以其豐富的多態(tài)性、共顯性遺傳、重復性好和操作簡便等優(yōu)點日益受到人們的重視。本研究在建立和優(yōu)化蘋果SSR反應體系的基礎上，應用SSR分子標記技術對42份蘋果品種的遺傳多樣性進行

2、了研究，在分子水平上為蘋果種質(zhì)資源鑒定和品種親緣關系分析提供了依據(jù)，并對SSR分子標記技術應用于蘋果品種鑒定和品種權保護的可行性進行了評價。主要研究結果如下： (1)對蘋果品種SSR的反應體系進行了優(yōu)化，確定了最適反應體系：在20μL反應體系中，Mg2+、引物、和dNTP的最適濃度分別為2.5mmol·L-1、0.8μmol·L-1、0.10mmol·L-1；反應體系中TaqDNA聚合酶宜加入1U，模板DNA應加入15～30ng

3、。PCR反應熱循環(huán)程序：94℃預變性4min；94℃變性1min、48.5～52℃退火1min、72℃延伸1min，30個循環(huán)；最后72℃延伸5min。經(jīng)多次擴增試驗證明，該體系重復性和穩(wěn)定性良好。 (2)本研究用12對引物組合對42份蘋果品種進行了PCR擴增，共擴增出165條DNA譜帶，其中多態(tài)性帶90條，占擴增總帶數(shù)的54.88﹪，不同引物擴增的帶數(shù)分布在5～24條之間，平均13.6條。根據(jù)SSR譜帶數(shù)據(jù)統(tǒng)計結果，應用NTS

4、YS軟件進行遺傳相似系數(shù)計算，42份蘋果品種的相似系數(shù)的變化范圍在0.713～1.000之間，說明供試蘋果種質(zhì)資源間的遺傳變異不大，遺傳多樣性偏低。利用UPGMA法構建聚類樹狀圖，結果發(fā)現(xiàn)：在遺傳距離為0.800的閾值下SSR標記能很好的區(qū)分除富士系之外的全部供試品種(系)，將蘋果品種劃分為四個類群，絕大部分系譜相同或相似的品種聚在了一起?？梢姡琒SR分子標記技術能夠?qū)⑼ㄟ^常規(guī)雜交育種手段選育的品種區(qū)分開，而且能較好地揭示品種間的親緣關