IL-17在川崎病小鼠外周血細胞中分泌情況的探討.pdf

1、目的：IL-17是一種細胞因子新亞型，其與已知的細胞因子家族不同，它被認為是一個前炎癥因子， IL-17在體內可由Th17、NK細胞、CD+8淋巴細胞、中性粒細胞等生成。IL-17和生成IL-17的細胞在自身免疫性疾病中能夠引起機體的主動免疫并且在病理損害方面發(fā)揮重要的作用，而川崎病是一種自身免疫性疾病，且其發(fā)病機制目前尚不清楚，本研究通過萃取干酪乳桿菌細胞壁成分腹腔注射BALB/C小鼠，建立川崎病動物模型，使用流式細胞儀檢測不同時間點

2、不同淋巴細胞亞群及中性粒細胞分泌IL-17的情況，及酶聯(lián)免疫吸附法測量IL-17和INF-γ在血漿中的含量，從而探討IL-17在川崎病急性期的作用。
　　方法：萃取干酪乳桿菌細胞壁成分(LCWE),并調致終濃度為0.8mg/ml，將60只BALB/C小鼠分為對照組10只，實驗組50只，注射LCWE0.7ml，于注射后的第18小時、3天、5天、10天、28天分別取10只小鼠的外周血，處死并留取心臟組織，送做病理切片HE染色觀察。外周

3、血肝素鈉抗凝后留取血漿成分，酶聯(lián)免疫吸附法測量IL-17和INF-γ含量，血細胞應用流式細胞儀檢測3天及對照組CD+69在淋巴細胞中的比例；各實驗分組及對照組CD+4、CD+8亞群在淋巴細胞中的比例及淋巴細胞、中性粒細胞在外周血中的比例；分泌IL-17和INF-γCD+4、CD+8亞群比例及分泌IL-17的中性粒細胞的比例；血漿中的IL-17含量及分泌IL-17的CD+4、CD+8亞群比例與分泌INF-γ的CD+4、CD+8亞群比例相關

4、性，血漿中IL-17與中性粒細胞及分泌IL-17的中性粒細胞的相關性。
　　結果：1.病理切片：實驗組小鼠的病理變化主要為心臟血管炎性改變，其中冠狀血管病變嚴重，12小時有少量中性粒細胞浸潤，3天有大量的中性粒細胞和淋巴細胞浸潤，以中性粒細胞為主，5天以淋巴細胞為主，10天炎性細胞較前明顯減少，28天浸潤的炎性細胞基本消失。同時心內膜、心外膜、心肌組織中均有炎性細胞浸潤，且心肌細胞腫脹，胞質染色嗜酸性增強。對照組小鼠心臟組織無炎癥

5、。2.免疫學指標：18小時實驗組CD+3CD+69/CD+3與對照組比較有顯著統(tǒng)計學意義，P<0.001，18小時時比值上升,最高點(47.47％±2.77%)，后下降，在第5天時下降到最低點，又上升逐漸恢復并超過對照組水平，與對照組比較有統(tǒng)計學意義。CD+4細胞在18小時時比值最高(66.11%±4.09%)，后下降,與對照組比較18小時、10天、28天有統(tǒng)計學意義。CD+8細胞先升高后下降再升高，高峰在5天(16.81%±1.02%

6、),各實驗組與對照組比較均有統(tǒng)計學意義。中性粒細胞在5天時達高峰(10.32%±1.26%)，且3、5、10天組與對照組比較有統(tǒng)計學意義。IL-17在其分泌細胞CD+4、 CD+8、中性粒細胞的比例均先增加后降低， CD+4是第5天達高峰(1.54%±0.17%)， CD+8而是18小時時最高(0.58%±0.16%)，中性粒細胞是3天時達高峰(1.46%±0.23%)，且除CD+810天、28天外各實驗組與對照組比較均有統(tǒng)計學意義。I

7、NF-γ在其分泌細胞CD+4、 CD+8的比例均先增加后降低， CD+4是第3天達高峰(0.73%±0.15%)， CD+8而是5天時最高(14.15%±0.79%)，CD+4是18小時、3天組與之比較，有統(tǒng)計學意義。CD+8是18小時、3天、5天、10天與對照組比較，具有統(tǒng)計學意義。血漿中IL-17、INF-γ均是先增高，后降低，IL-17是3天時最高(42.82±5.77Pg/ml)，且與對照組比較有統(tǒng)計學意義。INF-γ是3天時最

8、高(105.53±7.22Pg/ml),5天、10天與對照組比較有統(tǒng)計學意義。3.統(tǒng)計學指標：血漿中IL-17的含量與全血中淋巴細胞的比值呈負相關關系，P<0.05，IL-17與分泌IL-17的CD+4亞群比例呈正相關關系，P<0.05， IL-17與分泌IL-17的CD+8亞群比例則相反，而成負相關關系，P<0.05，血漿中的IL-17含量及分泌IL-17的CD+4、CD+8亞群比例與分泌INF-γ的CD+4、CD+8亞群比例呈正相關

9、關系，且P<0.05。在血漿中IL-17與INF-γ的含量呈正相關關系，但P>0.05，還不能說明二者之間存在相關性。血漿中IL-17的含量與中性粒細胞在全血中的比例呈正相關關系，P<0.05；血漿中IL-17與分泌IL-17中性粒細胞負相關關系，但P>0.05，還不能說明二者之間有相關性。
　　結論：1.干酪乳桿菌細胞壁成分(LCWE)腹腔注射能夠誘導BALB/C小鼠冠狀血管損害。其機制是通過超抗原誘導淋巴細胞大量的增值與活化。