2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題（含答案詳解+作文范文）_第1頁(yè)
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1、目的:構(gòu)建M-CSF、MCM7及MCM7功能結(jié)構(gòu)域突變體原核表達(dá)載體,并于E Coli. BL21 DE3中進(jìn)行蛋白表達(dá),建立M-CSF和MCM7原核表達(dá)體系。
　　方法:使用PCR技術(shù)擴(kuò)增M-CSF與MCM7全長(zhǎng)及MCM7功能結(jié)構(gòu)域突變體活性區(qū),并連接插入GST標(biāo)記的原核表達(dá)質(zhì)粒pGEX-4T-2,構(gòu)建M-CSF和MCM7及MCM7功能結(jié)構(gòu)域突變體原核表達(dá)載體 pGEX-4T-2/M-CSF、pGEX-4T-2/MCM7/DM1

2、-331、pGEX-4T-2/MCM7/DM332-538、pGEX-4T-2/MCM7/DM538-719和pGEX-4T-2/MCM7/DM1-719。經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳、PCR和測(cè)序鑒定后,用氯化鈣法分別轉(zhuǎn)化E Coli. BL21 DE3菌株,經(jīng)氨芐青霉素篩選并擴(kuò)增陽(yáng)性克隆后,用IPTG誘導(dǎo)蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:瓊脂糖凝膠電泳分析顯示插入質(zhì)粒的片段大小與M-CSF和MCM7及MCM7功能結(jié)構(gòu)域突變體分子大小相當(dāng),DAN測(cè)序分

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