外傷性角膜散光防治的基礎(chǔ)和臨床研究.pdf

1、鄭州大學(xué)博士學(xué)位論文外傷性角膜散光防治的基礎(chǔ)和臨床研究姓名：鄭廣瑛申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：眼科學(xué)指導(dǎo)教師：張金嵩20070508鄭州大學(xué)2007年博士研究生論文外傷性角麟散光的基礎(chǔ)和臨床研究antisenseoligonueleotide，TGF一＆ASON)轉(zhuǎn)染角膜外傷縫合術(shù)后的瘢痕組織，然后通過裂隙燈觀察、HE染色、免疫組化和熒光定量PCR等檢測(cè)方法，從大體形態(tài)、組織結(jié)構(gòu)、蛋白數(shù)量及基因水平等不同層面觀察分析T6F一82反義寡核苷酸

2、對(duì)TGFB2的活性的影響，為實(shí)現(xiàn)藥物干預(yù)減少瘢痕形成以控制外傷性角膜散光的設(shè)想提供理論依據(jù)。方法1TGF—B2反義寡核苷酸(anti—senseoligodeoxynueleofide，ASON)的制備；根據(jù)兔TGFD2mRNA序列(Genebank號(hào)AY429466)，由上海生工生物技術(shù)有限公司合成一段2lb的ASON，其序列為5‘一AGAAGTTGGCATTATACCCTT3’，并合成一段錯(cuò)義寡核苷酸(missenseoligode

3、oxynucleotide，MSON)作為對(duì)照。2選用清潔級(jí)健康無(wú)眼病的新西蘭大向兔24只，雌雄兼用，月齡為3個(gè)月。隨機(jī)分組：實(shí)驗(yàn)組16只，雙眼均制各角膜穿孔傷縫合術(shù)后模型。左眼術(shù)后滴TGFp2ASON，為TGFp2ASON組；右眼滴生理鹽水，為生理鹽水組；對(duì)照組8只，不傲手術(shù)，同樣左眼滴TGFB2ASON，右眼滴生理鹽水。兩組分別于手術(shù)后4、7、14、28天取角膜標(biāo)本，每次6只，實(shí)驗(yàn)組4只，對(duì)照組2只。3觀察指標(biāo)：應(yīng)用裂隙燈觀察角膜瘢

4、痕組織的形態(tài)變化；HE染色觀察角膜基質(zhì)細(xì)胞，即成纖維細(xì)胞的激活、增生、分化情況；免疫組織化學(xué)法(SP法)檢測(cè)Ⅱ一SMA及纖維連接蛋白(FN)的染色情況；應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR觀察TGF一132的mRNA表達(dá)情況，評(píng)價(jià)TGF，&反義寡核苷酸對(duì)角膜創(chuàng)傷修復(fù)過程的影響及毒副作用。結(jié)果1裂隙燈觀察TGF陡ASON組：球結(jié)膜輕度充血，角膜縫線附近水腫，前房閃輝(O～)，虹膜紋理清晰，瞳孔圓居中，眼壓正常。隨著時(shí)問的延長(zhǎng)，眼前段炎癥反應(yīng)逐漸減輕，至