胡麻油煙凝聚物致人胚肺二倍體細胞惡性轉(zhuǎn)化作用研究.pdf

1、目的：通過建立人胚肺二倍體細胞體外惡性轉(zhuǎn)化模型，胡麻油煙凝聚物（SOFA）作為受試物重復(fù)染毒人胚肺二倍體細胞，觀察并檢測靶細胞形態(tài)變化，生長能力（如失去密度依賴性，失去接觸抑制，失去貼壁生長特性等）和生化表型的改變，以及移植于裸鼠體內(nèi)形成腫瘤的能力；流式細胞術(shù)對靶細胞進行DNA含量分析，以檢測SOFA對人胚肺二倍體細胞增殖及細胞周期的影響，為研究胡麻油煙對人體潛在的致癌危險性提供實驗依據(jù)。 方法：采用四甲基偶氮唑藍（MTT）比

2、色法及克隆形成試驗，觀察并檢測SOFA（終濃度分別為25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml）對人胚肺二倍體細胞的毒性作用及其對人胚肺二倍體細胞克隆形成率的影響，觀察靶細胞細胞形態(tài)、克隆形態(tài)變化、SOFA短期誘導(dǎo)人胚肺二倍體細胞發(fā)生細胞轉(zhuǎn)化的作用； SOFA重復(fù)染毒（染毒24h后，終止染毒48h后，再染毒24h）人胚肺二倍體細胞，以S9混合液作為體外代謝活化系統(tǒng)，表達培養(yǎng)40d，觀察靶細胞形態(tài)

3、變化、有無轉(zhuǎn)化灶形成；計數(shù)Ⅲ型轉(zhuǎn)化灶，計算轉(zhuǎn)化率；對Ⅲ型轉(zhuǎn)化灶進行分離、表達培養(yǎng)4w，取表達培養(yǎng)后的Ⅲ型轉(zhuǎn)化灶細胞進行生物學(xué)性狀檢測、惡性程度測定（ConA凝集試驗、軟瓊脂培養(yǎng)試驗），并將轉(zhuǎn)化細胞移植于裸鼠體內(nèi)，觀察其致瘤性；采用流式細胞術(shù)對靶細胞進行DNA含量分析，檢測SOFA對細胞周期及DNA倍體指數(shù)（DI值）的影響，并計算細胞增殖指數(shù)PI值，觀察SOFA對細胞增殖的影響。 結(jié)果： MTT比色法及克隆形成試驗結(jié)果顯示：SO

4、FA重復(fù)染毒人胚肺二倍體細胞后，終濃度為400μg/ml劑量組對人胚肺二倍體細胞生長具有明顯的抑制作用，其OD值與DMSO對照組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），其它劑量組吸光度值雖與DMSO溶劑對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，但對細胞增殖均有一定的抑制作用，并呈現(xiàn)一定的濃度依賴效應(yīng)（r=－0.430，P<0.01）；人胚肺二倍體細胞受SOFA重復(fù)攻擊后，細胞相對克隆形成率（R-CFE）下降5％~75％，且具有明顯的劑量反應(yīng)關(guān)系（r=

5、–0.917，P<0.05）；靶細胞及克隆形態(tài)表現(xiàn)出發(fā)生轉(zhuǎn)化的形態(tài)學(xué)改變。細胞體外惡性轉(zhuǎn)化試驗結(jié)果顯示：實驗劑量范圍內(nèi)的SOFA可不同程度誘發(fā)人胚肺二倍體細胞形成Ⅲ型細胞轉(zhuǎn)化灶，轉(zhuǎn)化細胞生長失去接觸抑制性、飽和密度增大、ConA凝集能力增強、錨著依賴性喪失，并具有裸鼠體內(nèi)成瘤性等多種細胞發(fā)生惡性變的生物學(xué)表型改變。流式細胞術(shù)DNA含量分析結(jié)果顯示：實驗劑量范圍內(nèi)的SOFA可促進人胚肺二倍體細胞加速分裂，S期比率增高，PI值增高，DNA含