硫酸鈹致人胚肺成纖維細胞凋亡線粒體途徑的作用機制.pdf

1、目的：
　　本研究觀察不同濃度硫酸鈹（BeSO4）對體外培養(yǎng)人胚肺成纖維細胞（MRC-5）早期凋亡率、線粒體膜電位的影響，凋亡誘導因子（AIF）、凋亡蛋白酶激活因子（Apaf-1）mRNA以及蛋白表達的改變，研究線粒體通透性轉換孔（mPTP）在BeSO4致體外培養(yǎng)MRC-5細胞凋亡中的作用，并觀察mPTP開放抑制劑環(huán)孢霉素A（CsA）與促開放劑蒼術苷（ATR）對此作用的干預。
　　方法：
　　體外培養(yǎng)MRC-5細胞系，

2、采用CCK-8法確定CsA和ATR干預劑量；試驗分空白對照組、BeSO4染毒組（劑量分別為1、10、100μmol/L）、干預組（10μmol/L BeSO4+10μmol/L CsA和10μmol/L BeSO4+10μmol/L ATR）、干預對照組（10μmol/L CsA和10μmol/L ATR）；分別染毒及干預24h、48h、72h后，收集細胞進行試驗，流式細胞術檢測細胞早期凋亡率，JC-1熒光探針標記檢測線粒體膜電位的改變

3、，實時熒光定量逆轉錄-聚合酶鏈式反應（qRT-PCR）檢測AIF、Apaf-1 mRNA表達，蛋白免疫印記法（Western Blot）檢測各劑量組AIF、Apaf-1蛋白表達水平。
　　結果：
　　1.染毒24h、48h、72h，CCK-8法確定CsA和ATR干預劑量均為10μmol/L。
　　2.BeSO4低、中、高劑量組分別染毒24h、48h、72h，MRC-5細胞早期凋亡率出現不同程度降低，染毒72h，BeSO

4、4低、中、高劑量染毒組與同時相空白對照組相比降低（P<0.05），CsA干預組與同時相空白對照組相比降低（P<0.05），ATR干預組與同時相空白對照組相比差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05），與BeSO4中劑量組相比增高但無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。
　　3.BeSO4低、中、高劑量分別染毒48h、72h，線粒體膜電位出現不同程度的增高，染毒48h，BeSO4高劑量組與同時相空白對照組及BeSO4中劑量組相比增高（P<0.05）

5、，染毒72h，BeSO4中劑量組與同時相空白對照組相比增高（P<0.05）；在72h時間點，CsA、ATR干預后與同時相BeSO4中劑量組相比線粒體膜電位降低（P<0.05），CsA、ATR對照組與同時相BeSO4中劑量組相比差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　4.BeSO4低、中、高劑量分別染毒24h、48h、72h，三個劑量組AIF mRNA表達與同時相空白對照組相比降低（P<0.05）；在24h、48h、72h時間點，C

6、sA干預組與同時相空白對照組相比降低（P<0.05），但與同時相BeSO4中劑量組相比差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；在24h、72h時間點，ATR干預組與同時相BeSO4中劑量組相比增高（P<0.05）。
　　5.BeSO4低、中、高劑量分別染毒24h、48h、72h，三個劑量組Apaf-1 mRNA表達與同時相空白對照組相比降低（P<0.05）；在24h、72h時間點，CsA干預組與同時相空白對照組相比降低（P<0.05），

7、CsA干預組與同時相BeSO4中劑量組相比降低（P<0.05）；在24h、48h、72h時間點，ATR干預組與同時相空白對照組相比差異均具有統(tǒng)計學意義（P<0.05），在24h、48h時間點，與同時相BeSO4中劑量組相比增高（P>0.05）。
　　6.染毒48h、72h，BeSO4中、高劑量組與同時相空白對照組相比AIF蛋白表達降低（P<0.05）；在72h時間點，CsA干預組與同時相空白對照組相比降低（P<0.05），與同時相

8、BeSO4中劑量組相比降低（P>0.05），ATR干預組與同時相BeSO4中劑量組相比增高，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　7.染毒24h、48h，BeSO4中、高劑量組與同時相空白對照組相比Apaf-1蛋白表達降低（P<0.05）；在24h時間點，CsA干預組與同時相空白對照組相比降低（P<0.05），ATR干預組與同時相BeSO4中劑量組相比增高，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　結論：
　　Be