二倍體馬鈴薯原生質(zhì)體培養(yǎng)與體細(xì)胞融合技術(shù)研究.pdf

1、本試驗(yàn)對(duì)一批從CIP引進(jìn)馬鈴薯材料進(jìn)行倍性鑒定，研究倍性鑒定過(guò)程中材料與預(yù)處理對(duì)染色的影響；以篩選出的二倍體馬鈴薯葉肉細(xì)胞為原生質(zhì)體游離材料，研究二倍體馬鈴薯原生質(zhì)體培養(yǎng)的基本條件和影響因素以及體細(xì)胞融合參數(shù)對(duì)融合頻率的影響等。研究結(jié)果表明：
　?。?）在進(jìn)行馬鈴薯倍性鑒定時(shí)，取材是關(guān)鍵，由塊莖發(fā)根所得的根尖其分裂細(xì)胞明顯多于試管苗的根尖，且染色體清晰可見(jiàn)染色效果好；預(yù)處理以0.1％秋水仙堿處理5～8h效果最佳；染色劑中卡寶品紅較

2、醋酸洋紅的著色深，分色明顯；在鑒定的60份材料中，二倍體材料10份，三倍體材料7份，四倍體材料43份。
　?。?）原生質(zhì)體游離時(shí)針對(duì)不同材料所需的滲透壓不同，實(shí)驗(yàn)所用的三種基因型的滲透壓分別是Ⅲ-5為0.35～0.40M， JK3是0.35M，Ⅱ-10為0.30～0.45M；不同的酶液組合對(duì)原生質(zhì)體的產(chǎn)量有很大的影響，當(dāng)纖維素酶為0.8%，果膠酶為0.4%時(shí)，原生質(zhì)體產(chǎn)量最高，酶解最充分；實(shí)驗(yàn)采用愈傷組織和葉肉細(xì)胞分別進(jìn)行游離，兩

3、者的活性不存在差異，但產(chǎn)量葉肉細(xì)胞明顯高于愈傷組織；預(yù)處理能夠提高原生質(zhì)體的產(chǎn)量和活性；不同基因型的馬鈴薯葉肉細(xì)胞分離得到的原生質(zhì)體在產(chǎn)量、活性及細(xì)胞大小上都存在差異；不同激素組合對(duì)愈傷組織分化也存在很大的影響。
　　（3）化學(xué)誘導(dǎo)融合時(shí)，當(dāng)采用的融合劑為PEG6000，所用濃度為30%時(shí)，誘導(dǎo)的融合率最高；電融合中成串電壓和時(shí)間是決定原生質(zhì)體成串、膜接觸的關(guān)鍵參數(shù)，當(dāng)排列電壓為100v/cm，作用時(shí)間為30s時(shí)，成串率達(dá)到最大值

4、；當(dāng)直流脈沖電壓為1000v/cm，作用時(shí)間為100μs，脈沖次數(shù)為1次時(shí)，雙核融合率最高；化學(xué)融合和電融合在融合頻率上的差異不大，均在35%以上，但在愈傷形成時(shí)間及分化時(shí)間上，由電融合得到的細(xì)胞都較 PEG融合早，且愈傷的分化頻率大于PEG融合；不同基因型組合的融合細(xì)胞培養(yǎng)存在很大的差異，由Ⅲ-5+JK3組合融合培養(yǎng)得到的細(xì)胞分裂快，愈傷組織形成早，分化快，并得到了植株；而Ⅲ-5＋Ⅱ-10組合細(xì)胞分裂相對(duì)遲一些，但由化學(xué)融合培養(yǎng)的細(xì)胞