植物乳桿菌對(duì)IL-10基因敲除結(jié)腸炎小鼠黏附分子的影響.pdf

1、目的：觀察植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum，LP）灌胃對(duì)IL-10基因敲除小鼠腸道炎癥和淋巴細(xì)胞歸巢的影響。
　　 方法：20只IL-10基因敲除（knockout，KO）小鼠和20只未作基因敲除的背景鼠隨機(jī)分為4組：對(duì)照組（野生組WT）、野生加植物乳桿菌組（WT+LP）、IL-10基因敲除模型組（KO）、模型加植物乳桿菌組（KO+LP），所有小鼠均飼養(yǎng)無特殊病原微生物（Specific pathoge

2、n-free，SPF）條件下。從4周齡始WT和KO組每日予PBS灌胃，WT+LP和KO+LP組予溶于PBS的LP（109CFU/ml）灌胃，持續(xù)4-8周結(jié)束。試驗(yàn)結(jié)束后取各組小鼠結(jié)腸行炎癥評(píng)分和電鏡亞顯微結(jié)構(gòu)觀察，并作免疫組化檢測(cè)黏膜地址素細(xì)胞黏附分子-1（Mucosal addressin cell adhesion molecule-1，MAdCAM-1）和細(xì)胞間粘附分子-1（Intercellular adhesion molec

3、ule-1，ICAM-1）的表達(dá)水平。ELISA試劑盒檢測(cè)各組小鼠結(jié)腸促炎細(xì)胞因子TNF-α和IFN-γ表達(dá)水平，分別用RT-PCR和western blot檢測(cè)歸巢相關(guān)分子MAdCAM-1、ICAM-1、α4β7及CD3的mRNA和蛋白表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：4周齡的KO小鼠均出現(xiàn)結(jié)腸炎癥，8周齡時(shí)炎癥達(dá)高峰。LP能降低KO小鼠的炎癥評(píng)分，并能下調(diào)MAdCAM-1和ICAM-1的表達(dá)，但不能顯著抑制TNF-α和IFN-γ表達(dá)水

4、平。KO組小鼠CD3及黏附分子α4β7、ICAM-1和MAdCAM-1的mRNA和蛋白表達(dá)水平較WT組均明顯增高（mRNA：依次t=39.42；8.83；25.53；45.78，均p<0.01；CD3及黏附分子ICAM-1和MAdCAM-1的蛋白表達(dá)水平：依次t=19.04；29.57；12.29，均p<0.01）。予以益生菌LP灌胃后，KO+LP組小鼠CD3及黏附分子α4β7、ICAM-1和MAdCAM-1的mRNA和蛋白表達(dá)水平較K

5、O組均明顯降低（mRNA：依次t=20.34；4.95；14.21；22.31，均p<0.01；CD3及黏附分子ICAM-1和MAdCAM-1的蛋白表達(dá)水平：依次t=6.82；14.10；7.03，均p<0.01）；WT+LP組小鼠CD3及黏附分子α4β7、ICAM-1和MAdCAM-1的mRNA較WT組均明顯降低（依次t=9.33；10.55；7.75；6.69，均p<0.01），而WT+LP組小鼠CD3及黏附分子ICAM-1和MAd