腸道菌群變化對(duì)小鼠潰瘍性結(jié)腸炎的影響.pdf

1、目的：
　　通過(guò)對(duì)小鼠糞便微生物菌群的研究，探索使用糞便微生物移植（FMT）來(lái)治療潰瘍性結(jié)腸炎（UC）的新方法。潰瘍性結(jié)腸炎病人心肌梗死和中風(fēng)等心血管事件發(fā)生增加，但卻伴隨著機(jī)體總膽固醇和低密度脂蛋白水平的降低。初步探討小鼠巨噬細(xì)胞膽固醇外流率的研究方法及其如何受到細(xì)胞外膽固醇濃度和LPS的影響。
　　方法：
　　1將BALB/c和C57BL/6J小鼠分組，采用葡聚糖硫酸鈉(DSS)進(jìn)行UC造模，觀察體重的變化，接著對(duì)

2、兩個(gè)品系的小鼠進(jìn)行 FMT。取 BALB/c結(jié)腸進(jìn)行組織學(xué)觀察，qPCR檢測(cè)小鼠結(jié)腸內(nèi)菌群數(shù)量變化和炎癥因子的表達(dá)水平。
　　2探討B(tài)ODIPY-cholesterol標(biāo)記細(xì)胞，測(cè)量膽固醇外流率的方法。優(yōu)化標(biāo)記時(shí)間和孵育時(shí)間；分別采用膽固醇、LPS、異常高膽固醇人血清和正常膽固醇人血清處理細(xì)胞，再對(duì)其膽固醇外流率進(jìn)行測(cè)定和比較。
　　結(jié)果：
　　1、經(jīng)過(guò)DSS造模后，BALB/c和C57BL/6J小鼠的體重下降，兩個(gè)品

3、系小鼠體重的降低在第4天出現(xiàn)顯著性差異。FMT治療后BALB/c小鼠的DAI指數(shù)降低，而C57BL/6J小鼠的DAI指數(shù)逐漸升高。對(duì)BALB/c小鼠結(jié)腸進(jìn)行組織病理學(xué)研究，發(fā)現(xiàn)DSS造模后的小鼠結(jié)腸黏膜發(fā)生潰瘍，結(jié)腸隱窩變淺和部分破壞并伴隨炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)。經(jīng)過(guò)FMT治療后BALB/c小鼠的結(jié)腸組織結(jié)構(gòu)與正常小鼠相似。DSS造模后小鼠結(jié)腸中乳桿菌、大腸桿菌、擬桿菌的數(shù)量均顯著增加（P<0.01），雙歧桿菌的數(shù)量顯著降低（P<0.01）。造

4、模后治療組的乳桿菌和大腸桿菌的數(shù)量顯著降低（P<0.01），而雙歧桿菌和擬桿菌的數(shù)量顯著增加（P<0.01）。治療后進(jìn)一步經(jīng)過(guò)恢復(fù)期后大腸桿菌的數(shù)量顯著降低（P<0.01），而乳桿菌、雙歧桿菌和擬桿菌的數(shù)量沒(méi)有顯著變化（P>0.05）。造模后IL-6、IL-1、IL-10、IFN-γ、IL-12表達(dá)水平較對(duì)照組增加，其中IL-6、IL-1（P<0.05）、IFN-γ（P<0.01）表達(dá)有顯著差異。FMT治療組IL-1、IFN-γ表達(dá)水平

5、顯著降低（P<0.01）。在治療停止5天后，所有檢測(cè)的細(xì)胞因子水平與對(duì)照組沒(méi)有顯著差異（P>0.05）。
　　2、BODIPY-膽固醇標(biāo)記RAW264.7小鼠巨噬細(xì)胞2-8h后，測(cè)定膽固醇外流率，發(fā)現(xiàn)其隨外加膽固醇濃度(0.1mM、0.5mM、2.5mM)的增大呈遞減趨勢(shì)（P<0.01）。LPS刺激后細(xì)胞的膽固醇外流率降低（P<0.05）。采用高膽固醇人血清處理細(xì)胞后，膽固醇的外流率降低（P<0.05）。
　　結(jié)論：FMT對(duì)