絲膠對2型糖尿病大鼠肝臟損傷的保護作用.pdf

1、隨著糖尿病患病率的增加,出現(xiàn)糖尿病并發(fā)癥的患者逐年增多。對于糖尿病并發(fā)癥,人們關(guān)注最多的是血管及神經(jīng)系統(tǒng)病變,而對于糖尿病合并肝臟病變的研究較少,有研究發(fā)現(xiàn)糖尿病患者中合并肝臟病變者高達50％以上。肝臟既是胰島素作用的靶器官,又是胰島素抵抗發(fā)生的重要靶器官,因此,肝臟胰島素抵抗機制的研究對于加強糖尿病肝病的相關(guān)研究、改善糖尿病病情及病情進展、改善糖尿病患者的生活質(zhì)量具有重要意義。
　　絲膠是分子量為10-300kd,由18種氨基酸

2、組成的高分子水溶性蛋白。絲膠的含量約占蠶絲總量的30%,但在繅絲和精煉時極大部分被除去,造成了極大的浪費,這些優(yōu)質(zhì)蛋白的有效利用一直是蠶絲界所希望的。近年的研究發(fā)現(xiàn),絲膠具有良好的降血糖作用,但有關(guān)絲膠對糖尿病肝臟胰島素抵抗的保護作用,國內(nèi)、外均未見報道。本研究以鏈脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)致2型糖尿病大鼠模型為研究對象,探討絲膠對2型糖尿病大鼠肝臟損傷的保護作用,為治療和防治糖尿病并發(fā)癥開辟新途徑。
　　第

3、一部分絲膠對2型糖尿病大鼠肝臟胰島素信號通路相關(guān)因子的作用
　　目的:
　　觀察絲膠對2型糖尿病大鼠肝臟胰島素受體(Insulin Receptor,IR)和胰島素受體底物-2(Insulin Receptor Substrate-2,IRS-2)表達及肝糖原含量的影響,探討絲膠對2型糖尿病大鼠肝臟胰島素信號通路的作用及可能機制。
　　方法:
　　1.60只清潔級雄性SD大鼠隨機分為5組:正常對照組、糖尿病模型組

4、、絲膠治療組、陽性對照組和絲膠預防組,每組12只。正常對照組大鼠不做任何處理;糖尿病模型組、絲膠治療組、陽性對照組和絲膠預防組大鼠以2%STZ(25mg/kg,3d)連續(xù)腹腔注射制作2型糖尿病大鼠模型,一周后以血糖(Blood Glucose,BG)≥16.7mmol/L作為成模標準。待模型成功建立后,糖尿病模型組大鼠不做任何處理;絲膠治療組大鼠給予絲膠(2.4g/kg/d)連續(xù)灌胃35天;陽性對照組大鼠給予二甲雙胍(55.33mg/k

5、g/d)連續(xù)灌胃,時間同絲膠治療組。絲膠預防組大鼠于2%STZ(25mg/kg)連續(xù)腹腔注射之前給予絲膠(2.4g/kg/d)灌胃35天。
　　2.釆用葡萄糖氧化酶法檢測各組大鼠的BG。
　　3.分別采用SP免疫組化法、Western Blotting法檢測各組大鼠肝臟IR和IRS-2蛋白的表達。
　　4.釆用RT-PCR法檢測各組大鼠肝臟IR、IRS-2 mRNA的表達。
　　5.釆用過碘酸-Schiff染色法

6、觀察各組大鼠肝糖原的含量。
　　結(jié)果:
　　1.各組大鼠的BG:正常對照組大鼠的BG為(10.83±2.03)mmol/L,糖尿病模型組大鼠的BG為(29.45±4.82)mmol/L,明顯高正常對照組大鼠的BG水平(P<0.01);絲膠治療組、陽性對照組、絲膠預防組大鼠的BG分別為(13.20±4.09)mmol/L、(13.18±2.30)mmol/L、(10.04±2.29)mmol/L,均明顯低于糖尿病模型組大鼠的B

7、G水平(P<0.01);且絲膠治療組、絲膠預防組與陽性對照組比較無明顯差異(P>0.05)。
　　2.各組大鼠肝臟IR的表達:IR蛋白免疫陽性產(chǎn)物為棕黃色和(或)棕褐色顆粒,主要位于肝細胞的胞膜和胞漿。與正常對照組比較,糖尿病模型組大鼠肝臟IR蛋白及mRNA的表達明顯降低(P<0.01);絲膠治療組、絲膠預防組與陽性對照組大鼠肝臟IR蛋白及mRNA的表達較糖尿病模型組大鼠明顯升高(P<0.01),且絲膠治療組和陽性對照組比較無明顯

8、差異(P>0.05)。
　　3.各組大鼠肝臟IRS-2的表達:IRS-2蛋白免疫陽性產(chǎn)物為棕黃色和(或)棕褐色顆粒,主要位于肝細胞的胞膜和胞漿。正常對照組比較,糖尿病模型組大鼠肝臟IRS-2蛋白及mRNA的表達明顯降低(P<0.01);絲膠治療組、絲膠預防組與陽性對照組大鼠肝臟 IRS-2蛋白及mRNA的表達較糖尿病模型組大鼠明顯升高(P<0.01),且絲膠治療組和陽性對照組比較無明顯差異(P>0.05)。
　　4.各組大鼠

9、肝糖原的含量:肝糖原陽性結(jié)果表現(xiàn)為紫紅色顆?；蚣毮侇w粒片狀聚集,主要位于肝細胞胞漿。糖尿病模型組大鼠肝糖原含量明顯低于正常對照組大鼠(P<0.01);絲膠治療組、絲膠預防組和陽性對照組大鼠的肝糖原含量均明顯高于糖尿病模型組大鼠(P<0.01);且絲膠治療組與陽性對照組比較無明顯差別(P>0.05)。
　　小結(jié):
　　絲膠可通過上調(diào)糖尿病肝臟IR和IRS-2的表達,改善糖尿病大鼠的胰島素抵抗,增加肝糖原的儲存,起到降低血糖預防

10、并發(fā)癥的作用。
　　第二部分絲膠對2型糖尿病大鼠肝臟相關(guān)炎癥因子的作用
　　目的:
　　探討絲膠對2型糖尿病大鼠肝臟腫瘤壞死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)和肝細胞核因子-4α(Hepatocyte Nuclear Factor4α,HNF-4α)作用及機制。
　　方法:
　　1.60只清潔級雄性SD大鼠隨機分為5組:正常對照組、糖尿病模型組、絲膠治療組、陽性對照組和絲

11、膠預防組,每組12只。正常對照組大鼠不做任何處理;糖尿病模型組、絲膠治療組、陽性對照組和絲膠預防組大鼠以2%STZ(25mg/kg,3d)連續(xù)腹腔注射制作2型糖尿病大鼠模型,一周后以血糖(Blood glucose,BG)≥16.7mmol/L作為成模標準。待模型成功建立后,糖尿病模型組大鼠不做任何處理;絲膠治療組大鼠給予絲膠(2.4g/kg/d)連續(xù)灌胃35天;陽性對照組大鼠給予二甲雙胍(55.33mg/kg/d)連續(xù)灌胃,時間同絲膠

12、治療組。絲膠預防組大鼠于2%STZ(25mg/kg)連續(xù)腹腔注射之前給予絲膠(2.4g/kg/d)灌胃35天。
　　2.分別采用SP免疫組化法、Western Blotting法檢測各組大鼠肝臟TNF-α和HNF-4α蛋白的表達。
　　3.采用RT-PCR法檢測各組大鼠肝臟TNF-α和HNF-4αmRNA的表達。
　　結(jié)果:
　　1.各組大鼠肝臟TNF-α的表達:TNF-α蛋白免疫陽性產(chǎn)物為棕黃色顆粒,主要位于肝

13、細胞胞漿。與正常對照組比較,糖尿病模型組大鼠肝臟TNF-α蛋白及mRNA的表達均明顯升高(P<0.01);絲膠治療組、陽性對照組與絲膠預防組大鼠肝臟TNF-α蛋白及mRNA的表達較糖尿病模型組大鼠明顯降低(P<0.01);且絲膠治療組與陽性對照組比較無明顯差異(P>0.05)。
　　2.各組大鼠肝臟 HNF-4α的表達:HNF-4α蛋白免疫陽性產(chǎn)物為棕黃色顆粒狀,主要位于肝細胞胞核。糖尿病模型組大鼠肝臟HNF-4α蛋白及mRNA的