羅格列醇對糖尿病大鼠肝損傷的保護作用.pdf

1、目的：通過研究2型糖尿病大鼠肝組織病理改變以及肝組織中血紅素加氧酶-1(HO-1)和環(huán)氧合酶-2(COX-2)的表達情況，探討2型糖尿病大鼠肝損傷與HO-1及COX-2的關系，明確羅格列酮干預對糖尿病大鼠肝損傷的作用以及羅格列酮是否影響了HO-1和COX-2的表達。
　　方法：高脂飲食結合小劑量鏈脲菌素(STZ，30mg/kg)一次性腹腔注射制造2型糖尿病大鼠模型，將大鼠隨機分為對照組、糖尿病組及羅格列酮干預組(1.42mg/(k

2、g·d)，灌胃)分別于10W末及24W末留取血清及肝組織，比較各組血生化指標及肝組織丙二醛(MDA)含量；應用光鏡觀察各組肝組織形態(tài)的改變；應用逆轉錄多聚酶鏈反應(RT-PCR)檢測肝組織中HO-1mRNA的表達，應用實時定量PCR測定COX-2 mRNA的表達；應用免疫組化檢測HO-1及COX-2蛋白的定位及水平。
　　結果：
　　1.癥狀、體征
　　糖尿病組大鼠在注射STZ后出現明顯的多尿、多飲、多食等癥狀，隨著病

3、程的進展，上述癥狀逐漸加重且出現皮毛污穢無光澤，毛發(fā)稀疏，行為遲鈍。羅格列酮干預組上述癥狀較糖尿病組無明顯改善。
　　2.生化指標的改變10W時，糖尿病組大鼠的空腹血糖、胰島素、甘油三酯、膽固醇(p＜0.05)、谷丙轉氨酶較同期對照組均顯著升高(p<0.01)。24W時糖尿病組大鼠的空腹血糖、胰島素、甘油三酯、膽固醇、谷丙轉氨酶和糖化血紅蛋白較24W對照組大鼠均顯著升高(p＜0.01)。羅格列酮干預組大鼠的胰島素、甘油三酯、膽固醇

4、和谷丙轉氨酶與24W糖尿病組大鼠相比明顯下降(p＜0.01)，但空腹血糖、糖化血紅蛋白和谷草轉氨酶與24W糖尿病組大鼠無差異(p＞0.05)。
　　3.血糖鉗夾實驗的結果糖尿病組大鼠葡萄糖輸注率(GIR)為5.45±0.84 mg/kg/min，對照組大鼠GIR為11.34±0.76mg/kg/min。糖尿病組大鼠GIR與對照組相比明顯降低(p＜0.01)，證明糖尿病組大鼠中存在胰島素抵抗，2型糖尿病大鼠模型制造成功。
　　

5、4.肝組織MDA測定結果24W時糖尿病組大鼠肝組織MDA含量(7.79±0.36)較同期對照組(3.59±0.30)明顯升高(p＜0.01)；羅格列酮干預組(5.79±0.39)較24W糖尿病組MDA含量明顯減少(p＜0.01)，羅格列酮干預組高于對照組(p＜0.01)。
　　5.HE染色結果對照組大鼠肝小葉結構清晰，肝細胞排列整齊，在中央靜脈周圍呈放射狀分布。肝細胞大小、形態(tài)均正常，細胞核結構清晰，位于細胞中央，肝細胞未見脂肪變

6、性或者壞死。24W糖尿病組大鼠肝小葉結構消失或者紊亂，肝索排列紊亂，肝竇擴張，肝細胞明顯腫脹，胞質內可見大小不等的脂滴，伴有成堆炎細胞的浸潤，在中央靜脈周圍可見纖維組織增生。羅格列酮干預組肝細胞結構尚清晰，肝索結構排列尚整齊，肝細胞的體積較糖尿病組減小，胞漿內脂滴的數目明顯減少，甚至消失，炎細胞及纖維組織明顯減少。
　　6.HO-1及COX-2免疫組化結果對照組大鼠肝組織中偶見HO-1在肝枯否氏細胞(Kupffer細胞)中呈弱陽性

7、表達。糖尿病組肝組織中可見HO-1在Kupffer細胞及肝細胞中廣泛表達，以胞漿為主，呈棕黃色顆粒，其陽性染色光密度值為(0.2707±0.0017)，較對照組(0.1042±0.0042)明顯升高，P值＜0.01，具有統(tǒng)計學意義。羅格列酮治療組，HO-1在Kupffer細胞及肝細胞的胞漿中仍有表達，其陽性染色光密度值為(0.1423±0.0038)，較糖尿病組明顯下降，P值＜0.01，具有統(tǒng)計學意義，但高于對照組(p＜0.01)。

8、r>　　對照組大鼠肝組織中幾乎未見COX-2的陽性表達。糖尿病組可見COX-2在肝細胞中廣泛表達，以胞漿為主，呈棕黃色，其陽性染色光密度值為(0.2379±0.0045)較對照組(0.0883±0.0047)明顯升高，P值＜0.01，具有統(tǒng)計學意義。羅格列酮干預組肝細胞中仍可見COX-2的陽性表達顆粒，其陽性染色光密度值為(0.1676±0.0037)較糖尿病組明顯下降，P值＜0.01，具體統(tǒng)計學意義。但羅格列酮干預組COX-2陽性染色

9、光密度值高于對照組(p＜0.01)。
　　7.大鼠肝組織HO-1及COX-2 mRNA的相對表達量對照組、糖尿病組、羅格列酮干預組HO-1 mRNA測定值分別為0.23±0.03，0.51±0.03，0.39±0.02，糖尿病組較對照組HO-1 mRNA表達明顯增加，差異具有統(tǒng)計學意義(p＜0.01)。羅格列酮干預組與糖尿病組大鼠相比，HO-1 mRN，A表達量明顯下降，差異具有統(tǒng)計學差異(p＜0.01)。羅格列酮干預組高于對照組

10、(p＜0.01)。對照組、糖尿病組、羅格列酮干預組COX-2 mRNA測定值分別為0.0019±0.0002，0.0102±0.0005，0.0038±0.0005，糖尿病組較對照組表達明顯增加，差異具有統(tǒng)計學意義(p＜0.01)。羅格列酮干預組與糖尿病組大鼠相比，COX-2 mRNA表達量明顯下降，差異具有統(tǒng)計學差異(p＜0.01)。羅格列酮干預組高于對照組(p＜0.01)。
　　結論：
　　1.高脂飲食結合小劑量STZ一

11、次性腹腔注射造成大鼠血糖、血脂升高，血糖鉗夾試驗示GIR明顯下降，提示成功制造2型糖尿病大鼠模型。光鏡下觀察可見此模型大鼠肝組織形態(tài)改變，主要表現為肝細胞脂質沉積，炎癥細胞浸潤，纖維組織增多。
　　2.糖尿病組較對照組大鼠肝組織病理出現明顯改變，MDA含量增加，HO-1及COX-2蛋白含量增多，mRNA表達明顯增加；羅格列酮治療組大鼠肝組織病理改變明顯改善，脂肪沉積、炎性細胞浸潤及纖維化明顯減輕，肝組織中HO-1及COX-2表達下